GT1-7

GT1-7 es una sublínea clonal de neuronas hipotalámicas inmortalizadas de ratón que sintetizan y secretan la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH), también conocida como hormona liberadora de hormona luteinizante (LHRH). Estas células se desarrollaron mediante tumorigénesis genéticamente dirigida utilizando un modelo de ratón transgénico en el que se expresó el antígeno T grande SV40 bajo el control del promotor del gen GnRH. Esta estrategia dio lugar a tumores hipotalámicos de los que se derivaron varias líneas celulares secretoras de GnRH, entre ellas GT1-1, GT1-3 y GT1-7. Las células GT1-7 muestran un fenotipo neuronal diferenciado, que incluye la expresión de marcadores específicos de neuronas, como proteínas neurofilamentarias, enolasa específica de neuronas, proteínas asociadas a vesículas sinápticas (VAMP-2, SNAP-25) y cromogranina B. No expresan marcadores gliales como GFAP o proteínas de mielina, lo que confirma su identidad neuronal.

Funcionalmente, las células GT1-7 expresan ARNm de GnRH endógeno y secretan GnRH de forma episódica. Poseen todo el mecanismo de procesamiento necesario para convertir la pro-GnRH en GnRH madura y bioactiva, incluidas las endopeptidasas, carboxipeptidasas y enzimas amidadoras necesarias. Estas células también secretan el péptido asociado a la GnRH (GAP), un subproducto del procesamiento de la pro-GnRH. La caracterización bioquímica ha revelado múltiples formas moleculares tanto de pro-GnRH como de GnRH madura dentro de las células GT1-7 y en el medio de cultivo, lo que indica un procesamiento postraduccional activo. La GnRH secretada por GT1-7 es biológicamente activa, capaz de estimular la liberación de LH de las células hipofisarias anteriores in vitro.

Las células GT1-7 muestran una baja actividad migratoria in vitro, en contraste con otras líneas celulares de GnRH, como GN11, que se derivan de neuronas GnRH migratorias más inmaduras desde el punto de vista del desarrollo. Las células GT1-7 se consideran representativas de las neuronas GnRH hipotalámicas posmigratorias y forman colonias estrechamente conectadas y vinculadas a neuritas en cultivo. Su falta de motilidad, junto con sus rasgos neuronales maduros y su capacidad de respuesta a los factores reguladores, las convierte en un potente modelo para estudiar la regulación génica, el control del desarrollo y la fisiología secretora de las neuronas GnRH hipotalámicas.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

Para más información, consulte nuestra <a href=""/Quiénes somos/Garantía/"" hreflang=""x-default"">Declaración de garantía