HFF-1

HFF-1 ist eine humane Vorhautfibroblasten-Zelllinie, die häufig als Feederschicht für die Kultur humaner embryonaler Stammzellen (hESCs) und induzierter pluripotenter Stammzellen (iPSCs) verwendet wird. Die aus neonatalem Hautgewebe stammenden HFF-1-Zellen liefern wichtige extrazelluläre Matrixkomponenten und sezernieren wichtige Signalmoleküle, die die Anheftung von hESCs fördern und deren pluripotenten Zustand teilweise unterstützen. Diese Fibroblasten wurden auf ihre Expression mehrerer pluripotenzfördernder Wachstumsfaktoren untersucht, darunter TGFβ1, Activin A und Fibroblasten-Wachstumsfaktor 2 (FGF-2), obwohl ihre Wirksamkeit als Feederzellen je nach spezifischer Linie und Kulturbedingungen variieren kann.

In vergleichenden Studien sezernieren menschliche Vorhautfibroblasten wie HFF-1 nachweisbare Mengen an FGF-2 und Activin A, obwohl ihre Sekretionsmengen im Allgemeinen niedriger sind als die von embryonalen Fibroblasten der Maus. HFF-1-Zellen exprimieren auch BMP-4-mRNA und -Protein, obwohl die sezernierten Mengen an BMP-4-Dimeren extrem niedrig und in konditionierten Medien oft nicht nachweisbar sind, was wahrscheinlich auf intrazelluläre Sequestrierung oder Hemmung durch Gremlin zurückzuführen ist. Wichtig ist, dass die Sekretion von Wachstumsfaktoren durch HFF-1 durch mitotische Inaktivierung (z. B. Mitomycin C-Behandlung) und Medienzusammensetzung (z. B. KnockOut Serum Replacement vs. fötales Rinderserum) moduliert wird. Die Fähigkeit von HFF-1-Zellen, undifferenziertes hESC-Wachstum zu unterstützen, korreliert mit ihrer Sekretion von Aktivin A und TGFβ1, obwohl eine Ergänzung mit exogenem Aktivin A die Aufrechterhaltung von Pluripotenzmarkern wie SSEA3 verbessern kann, wenn diese Zellen als Feeders verwendet werden.

Insgesamt dient HFF-1 als nützliches menschliches Feeder-Zellmodell für Stammzellkultursysteme, die darauf abzielen, Xeno-Komponenten zu reduzieren. Ihre Fähigkeit, langfristige undifferenzierte hESC-Kulturen aufrechtzuerhalten, wird jedoch im Allgemeinen als weniger robust angesehen als die von aus der Maus stammenden Feeder-Zellen, es sei denn, sie werden mit spezifischen Wachstumsfaktoren ergänzt. Ihr menschlicher Ursprung macht sie jedoch besonders attraktiv für klinische und translationale Stammzellanwendungen, bei denen xenofreie Bedingungen unerlässlich sind.

37°C, 5%_CO2, befeuchtete Atmosphäre.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

Bei Cytion stehen wir hinter der Qualität und Lebensfähigkeit unserer Produkte. Wir garantieren, dass unsere Zellen zu Beginn der Kultur für 60 Tage nach dem Versand aus unseren Einrichtungen lebensfähig sind. Wir versichern, dass alle Materialien mit den im Analysezertifikat und/oder Produktblatt beschriebenen Spezifikationen übereinstimmen

Ausführliche Informationen finden Sie in unserer <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantieerklärung