HFF-1

HFF-1 je línia ľudských fibroblastov predkožky, ktorá sa často používa ako napájacia vrstva na kultiváciu ľudských embryonálnych kmeňových buniek (hESC) a indukovaných pluripotentných kmeňových buniek (iPSC). Bunky HFF-1 pochádzajúce z novorodeneckého kožného tkaniva poskytujú základné zložky extracelulárnej matrice a vylučujú kľúčové signálne molekuly, ktoré podporujú prichytenie hESC a čiastočne podporujú ich pluripotentný stav. Tieto fibroblasty boli hodnotené z hľadiska expresie niekoľkých rastových faktorov podporujúcich pluripotenciu vrátane TGFβ1, aktivínu A a fibroblastového rastového faktora 2 (FGF-2), hoci ich účinnosť ako napájacích buniek sa môže líšiť v závislosti od konkrétnej línie a podmienok kultivácie.

V porovnávacích štúdiách ľudské fibroblasty predkožky, ako napríklad HFF-1, vylučujú detekovateľné hladiny FGF-2 a aktivínu A, hoci ich hladiny sekrécie sú vo všeobecnosti nižšie ako hladiny pozorované u myších embryonálnych fibroblastov. Bunky HFF-1 tiež exprimujú mRNA a proteín BMP-4, hoci vylučované hladiny dimérov BMP-4 sú veľmi nízke a často nedetekovateľné v kondicionovanom médiu, pravdepodobne v dôsledku intracelulárnej sekvestrácie alebo inhibície gremlínom. Dôležité je, že sekrécia rastových faktorov HFF-1 je modulovaná mitotickou inaktiváciou (napr. liečba mitomycínom C) a zložením média (napr. náhrada KnockOut séra vs. fetálne hovädzie sérum). Schopnosť buniek HFF-1 podporovať rast nediferencovaných hESC koreluje s ich sekréciou aktivínu A a TGFβ1, hoci doplnenie exogénneho aktivínu A môže zlepšiť zachovanie markerov pluripotencie, ako je SSEA3, keď sa tieto bunky používajú ako kŕmidlá.

Celkovo HFF-1 slúži ako užitočný model kŕmnych buniek odvodených od človeka pre systémy kultivácie kmeňových buniek, ktorých cieľom je znížiť množstvo xeno-komponentov. Ich schopnosť udržiavať dlhodobé nediferencované kultúry hESC sa však vo všeobecnosti považuje za menej robustnú ako schopnosť kŕmnych buniek odvodených od myší, pokiaľ sa nekombinuje so špecifickou suplementáciou rastovými faktormi. Ich ľudský pôvod ich však robí obzvlášť atraktívnymi pre klinické a translačné aplikácie kmeňových buniek, kde sú nevyhnutné podmienky bez xenónov.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

V spoločnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopnosťou našich produktov. Garantujeme, že naše bunky budú životaschopné na začiatku kultivácie počas 60 dní po odoslaní z našich zariadení. Zaručujeme, že všetky materiály zodpovedajú špecifikáciám opísaným v certifikáte analýzy a/alebo v produktovom liste

Úplné informácie nájdete v našom <a href=""/Kto sme/záruka/"" hreflang=""x-default"">Vyhlásení o záruke