HFF-1

HFF-1 on ihmisen esinahan fibroblastisolulinja, jota käytetään usein syöttökerroksena ihmisen alkion kantasolujen (hESC) ja indusoitujen pluripotenttien kantasolujen (iPSC) viljelyssä. Vastasyntyneen ihokudoksesta peräisin olevat HFF-1-solut tuottavat välttämättömiä solunulkoisen matriksin komponentteja ja erittävät keskeisiä signaalimolekyylejä, jotka edistävät hESC:n kiinnittymistä ja tukevat osittain niiden pluripotenttia tilaa. Näiden fibroblastien ilmentymistä useiden pluripotenssia tukevien kasvutekijöiden, kuten TGFβ1:n, aktiviini A:n ja fibroblastikasvutekijä 2:n (FGF-2), osalta on arvioitu, vaikka niiden tehokkuus syöttösoluina voi vaihdella riippuen tietystä linjasta ja viljelyolosuhteista.

Vertailevissa tutkimuksissa ihmisen esinahan fibroblastit, kuten HFF-1, erittävät havaittavissa olevia määriä FGF-2:ta ja aktiviini A:ta, vaikka niiden eritystasot ovat yleensä alhaisemmat kuin hiiren alkion fibroblasteissa havaitut tasot. HFF-1-solut ilmentävät myös BMP-4:n mRNA:ta ja proteiinia, vaikka BMP-4-dimeerien eritystasot ovat erittäin alhaiset ja usein havaitsematta ehdollistetussa väliaineessa, mikä johtuu todennäköisesti solunsisäisestä sekvestraatiosta tai gremlinin aiheuttamasta inhibitiosta. Tärkeää on, että HFF-1:n kasvutekijöiden eritystä säätelevät mitoottinen inaktivointi (esim. mitomysiini C -käsittely) ja väliaineen koostumus (esim. KnockOut-seerumin korvaaminen vs. naudan sikiöseerumi). HFF-1-solujen kyky tukea erilaistumatonta hESC-kasvua korreloi niiden erittämän aktiviini A:n ja TGFβ1:n kanssa, vaikkakin eksogeenisen aktiviini A:n lisääminen voi parantaa pluripotenttimarkkereiden, kuten SSEA3:n, säilymistä, kun näitä soluja käytetään syöttäjinä.

Kaiken kaikkiaan HFF-1 toimii hyödyllisenä ihmisestä peräisin olevana syöttösolumallina kantasoluviljelyjärjestelmissä, joilla pyritään vähentämään ksenokomponentteja. Niiden kykyä ylläpitää pitkäkestoisia erilaistumattomia hESC-viljelmiä pidetään kuitenkin yleisesti ottaen heikompana kuin hiirestä peräisin olevien syöttösolujen kykyä ylläpitää pitkäkestoisia erilaistumattomia hESC-viljelmiä, ellei niitä yhdistetä erityiseen kasvutekijöiden lisäämiseen. Ihmisperäisyys tekee niistä kuitenkin erityisen houkuttelevia kliinisissä ja translaatiotutkimukseen liittyvissä kantasolusovelluksissa, joissa ksenovapaat olosuhteet ovat välttämättömät.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa