HFF-1

Το HFF-1 είναι μια σειρά ανθρώπινων ινοβλαστών της ακροποσθίας που χρησιμοποιείται συχνά ως στρώμα τροφοδοσίας για την καλλιέργεια ανθρώπινων εμβρυϊκών βλαστικών κυττάρων (hESC) και επαγόμενων πολυδύναμων βλαστικών κυττάρων (iPSC). Προερχόμενα από νεογνικό δερματικό ιστό, τα κύτταρα HFF-1 παρέχουν βασικά συστατικά εξωκυτταρικής μήτρας και εκκρίνουν βασικά σηματοδοτικά μόρια που προάγουν την προσκόλληση των hESC και υποστηρίζουν εν μέρει την πολυδύναμη κατάστασή τους. Αυτοί οι ινοβλάστες έχουν αξιολογηθεί ως προς την έκφραση διαφόρων αυξητικών παραγόντων που υποστηρίζουν την πολυδυναμία, συμπεριλαμβανομένων των TGFβ1, της ακτιβίνης Α και του αυξητικού παράγοντα ινοβλαστών 2 (FGF-2), αν και η αποτελεσματικότητά τους ως κύτταρα τροφοδότησης μπορεί να ποικίλλει ανάλογα με τη συγκεκριμένη σειρά και τις συνθήκες καλλιέργειας.

Σε συγκριτικές μελέτες, οι ινοβλάστες ανθρώπινης ακροποσθίας όπως ο HFF-1 εκκρίνουν ανιχνεύσιμα επίπεδα FGF-2 και ακτιβίνης Α, αν και τα επίπεδα έκκρισής τους είναι γενικά χαμηλότερα από εκείνα που παρατηρούνται στους εμβρυϊκούς ινοβλάστες ποντικού. Τα κύτταρα HFF-1 εκφράζουν επίσης το mRNA και την πρωτεΐνη BMP-4, αν και τα εκκρινόμενα επίπεδα διμερών BMP-4 είναι εξαιρετικά χαμηλά και συχνά μη ανιχνεύσιμα στο εξαρτημένο μέσο, πιθανότατα λόγω ενδοκυτταρικής δέσμευσης ή αναστολής από τη γκρεμλίνη. Είναι σημαντικό ότι η έκκριση των αυξητικών παραγόντων από τον HFF-1 διαμορφώνεται από τη μιτωτική αδρανοποίηση (π.χ. θεραπεία με μιτομυκίνη C) και τη σύνθεση των μέσων (π.χ. αντικατάσταση ορού KnockOut έναντι εμβρυϊκού ορού βοοειδών). Η ικανότητα των κυττάρων HFF-1 να υποστηρίζουν την ανάπτυξη αδιαφοροποίητων hESC συσχετίζεται με την έκκριση ακτιβίνης Α και TGFβ1, αν και η συμπλήρωση με εξωγενή ακτιβίνη Α μπορεί να βελτιώσει τη διατήρηση δεικτών πολυδυναμίας, όπως ο SSEA3, όταν αυτά τα κύτταρα χρησιμοποιούνται ως τροφοδότες.

Συνολικά, το HFF-1 χρησιμεύει ως ένα χρήσιμο μοντέλο κυττάρων τροφοδοσίας ανθρώπινης προέλευσης για συστήματα καλλιέργειας βλαστικών κυττάρων που αποσκοπούν στη μείωση των ξένων συστατικών. Ωστόσο, η ικανότητά τους να διατηρούν μακροχρόνιες αδιαφοροποίητες καλλιέργειες hESC θεωρείται γενικά λιγότερο ισχυρή από εκείνη των κυττάρων τροφοδοσίας που προέρχονται από ποντίκια, εκτός εάν συνδυαστεί με τη συμπλήρωση ειδικών αυξητικών παραγόντων. Η ανθρώπινη προέλευσή τους, ωστόσο, τα καθιστά ιδιαίτερα ελκυστικά για κλινικές και μεταφραστικές εφαρμογές βλαστικών κυττάρων, όπου οι συνθήκες απαλλαγμένες από ξένες ουσίες είναι απαραίτητες.

37°C, 5%_CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

Στην Cytion, υποστηρίζουμε την ποιότητα και τη βιωσιμότητα των προϊόντων μας. Εγγυόμαστε ότι τα κύτταρά μας θα είναι βιώσιμα κατά την έναρξη της καλλιέργειας για 60 ημέρες μετά την αποστολή από τις εγκαταστάσεις μας. Διαβεβαιώνουμε ότι όλα τα υλικά συμμορφώνονται με τις προδιαγραφές που περιγράφονται στο Πιστοποιητικό Ανάλυσης ή/και στο Φύλλο Προϊόντος

Για πλήρεις λεπτομέρειες, ανατρέξτε στην <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Δήλωση εγγύησης