HFF-1

HFF-1 to linia komórkowa ludzkich fibroblastów napletka często wykorzystywana jako warstwa odżywcza do hodowli ludzkich embrionalnych komórek macierzystych (hESC) i indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPSC). Pochodzące z tkanki skórnej noworodka, komórki HFF-1 dostarczają niezbędnych składników macierzy zewnątrzkomórkowej i wydzielają kluczowe cząsteczki sygnałowe, które promują przyczepianie się hESC i częściowo wspierają ich stan pluripotencjalny. Fibroblasty te zostały ocenione pod kątem ekspresji kilku czynników wzrostu wspierających pluripotencję, w tym TGFβ1, aktywiny A i czynnika wzrostu fibroblastów 2 (FGF-2), chociaż ich skuteczność jako komórek zasilających może się różnić w zależności od konkretnej linii i warunków hodowli.

W badaniach porównawczych ludzkie fibroblasty napletka, takie jak HFF-1, wydzielają wykrywalne poziomy FGF-2 i aktywiny A, chociaż ich poziomy wydzielania są ogólnie niższe niż te obserwowane w mysich fibroblastach embrionalnych. Komórki HFF-1 wyrażają również mRNA i białko BMP-4, chociaż wydzielane poziomy dimerów BMP-4 są bardzo niskie i często niewykrywalne w kondycjonowanej pożywce, prawdopodobnie z powodu sekwestracji wewnątrzkomórkowej lub hamowania przez gremlinę. Co ważne, wydzielanie czynników wzrostu przez HFF-1 jest modulowane przez inaktywację mitotyczną (np. leczenie mitomycyną C) i skład pożywki (np. KnockOut Serum Replacement vs. płodowa surowica bydlęca). Zdolność komórek HFF-1 do wspierania wzrostu niezróżnicowanych hESC koreluje z ich wydzielaniem aktywiny A i TGFβ1, chociaż suplementacja egzogenną aktywiną A może poprawić utrzymanie markerów pluripotencji, takich jak SSEA3, gdy komórki te są używane jako podajniki.

Ogólnie rzecz biorąc, HFF-1 służy jako przydatny model komórek zasilających pochodzenia ludzkiego dla systemów hodowli komórek macierzystych mających na celu redukcję ksenokomponentów. Jednak ich zdolność do utrzymywania długoterminowych niezróżnicowanych kultur hESC jest ogólnie uważana za mniej solidną niż w przypadku mysich komórek zasilających, chyba że w połączeniu ze specyficzną suplementacją czynnikiem wzrostu. Ich ludzkie pochodzenie sprawia jednak, że są one szczególnie atrakcyjne do zastosowań klinicznych i translacyjnych komórek macierzystych, w których niezbędne są warunki wolne od ksenonów.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym