Mine otse sisu juurde
HK-ZFN-AURKB-mEGFP rakud
Kude
Endocervix
Haigus
Adenokartsinoom
Metastaaside asukoht
Esmane kasvaja asukoht (emaka kaela sisemine osa)

Dokumendid

HK-ZFN-AURKB-mEGFP rakud

Cell line · Toote number 300173

Rakuliin HK-ZFN-AURKB-mEGFP on geneetiliselt muundatud inimrakumudel, mis on loodud selleks, et ekspresseerida AURKB (Aurora kinaas B) valku, mis on ühendatud mEGFP-ga (mo...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Tellimusel valmistatud
1

01Üldine teave

Kirjeldus

HK-ZFN-AURKB-mEGFP rakuliin on geneetiliselt muundatud inimese rakumudel, mis on loodud AURKB (Aurora Kinase B) valgu ekspresseerimiseks, mis on fusioonis mEGFP (monomeerne tõhustatud roheline fluorestseeruv valk), kasutades tsinksõrmenukleaasi (ZFN) tehnoloogiat. AURKB on seriin/treoniinkinaas, millel on oluline roll mitootilise kromosoomi segregatsioonis, tsütokineesis ja mitootilise spindli kontrollpunkti reguleerimises. Fusioon mEGFP-ga võimaldab AURKB aktiivsust ja lokaliseerimist rakus reaalajas visualiseerida, hõlbustades selle dünaamilise käitumise üksikasjalikku uurimist raku jagunemise ajal.

See rakuliin on võimas vahend teadlastele, kes uurivad mitoosi molekulaarmehhanisme ja AURKB spetsiifilisi funktsioone. MEGFP lisamine võimaldab fluorestsentsil põhinevaid analüüse ja elusraku kujutamist, mis annab ülevaate AURKB ruumilis-ajalisest jaotumisest. ZFN-tehnoloogia kasutamine tagab täpse genoomse integratsiooni, säilitades AURKB ekspressiooni usaldusväärsuse. See mudel on eriti väärtuslik vähiuuringutes, kus AURKB on sageli üleekspresseeritud ja seotud kasvajate tekkimisega, mis muudab selle potentsiaalseks sihtmärgiks terapeutiliste sekkumiste jaoks.

Kude
Endocervix
Haigus
Adenokartsinoom
Metastaaside asukoht
Esmane kasvaja asukoht (emaka kaela sisemine osa)
Rakendused
Aurora B-kinaasi (AURKB) bioloogia; mitootilise kinaasi pildistamine; kromosoomide segregeerumine; spindli kontrollpunkt; elusrakkude pildistamine; ZFN-põhise genoomi redigeerimise valideerimine; vähibioloogia

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Naine
Kasvuvõime
Järgija
GMO-staatus
GMO-S1
GMO-staatuse üksikasjad
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a ZFN-integrated mEGFP fusion at the endogenous AURKB locus for mitotic kinase imaging. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed rakud, millel on mosaiikne kivikuju
Rakutüüp
Epiteelirakud

04Tunnused

Viide
HK-ZFN-AURKB-mEGFP (Cytioni katalooginumber 300173)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_VL13
Hoiustaja
Ellenbergi labor (EMBL)

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Tooted
EGFP (tõhustatud roheline fluorestseeruv valk)

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM, w: 4,5 g/L glükoosi, w: 4 mM L-glutamiini, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM naatriumpüruvaati (Cytioni artikli number 820300a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Doonori vanus
30 aastat
Etniline kuuluvus
Afroameeriklane