B-LCL-HROC59

B-LCL-HROC59 est une lignée cellulaire lymphoblastique B humaine immortalisée par le virus d'Epstein-Barr (EBV), générée à partir de cellules B infiltrant la tumeur (TiBc) isolées d'un carcinome colorectal primaire désigné HROC59. La tumeur parentale a été réséquée chez un patient adulte de sexe masculin atteint d'un carcinome colorectal sporadique du côté droit et d'un cancer à un stade avancé. Le tissu tumoral frais a été dissocié mécaniquement pour obtenir des suspensions de cellules uniques, et les cellules B ont été immortalisées de manière sélective in vitro à l'aide d'un surnageant contenant l'EBV dérivé de la lignée cellulaire B95/8 de marmouset en présence de cyclosporine A afin de supprimer l'expansion des cellules T et NK. La culture à long terme a entraîné la croissance stable d'une population de cellules B monoclonales, comme l'a démontré l'analyse du réarrangement des gènes d'immunoglobulines.

B-LCL-HROC59 sécrète de l'immunoglobuline G (IgG) comme isotype exclusif, avec une production stable pendant une culture prolongée. Dans les tests de liaison cellulaires, l'IgG dérivée de B-LCL-HROC59 n'a montré qu'une liaison minimale aux lignées cellulaires allogéniques de carcinome colorectal testées, par rapport à d'autres IgG dérivées de TiBc présentant une réactivité plus forte avec les cellules tumorales. Aucun signe de prolifération spontanée des cellules B n'a été observé en l'absence d'EBV exogène pendant l'établissement de la culture, ce qui indique que l'immortalisation s'est produite in vitro plutôt que de refléter une transformation latente induite par l'EBV in vivo. En tant que lignée cellulaire B monoclonal, infiltrant les tumeurs et ayant déjà été exposée à l'antigène, B-LCL-HROC59 fournit un modèle défini pour étudier les réponses immunitaires humorales dans le microenvironnement du cancer colorectal et pour étudier la spécificité et les propriétés fonctionnelles des anticorps associés aux tumeurs.

37°C, 5%_CO2, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.

Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous nous portons garants de la qualité et de la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours après l'expédition de nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d'analyse et/ou la fiche produit

Pour plus de détails, veuillez consulter notre <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default""> Déclaration de garantie