B-LCL-HROC59

B-LCL-HROC59 ist eine durch das Epstein-Barr-Virus (EBV) immortalisierte humane B-Lymphoblastoid-Zelllinie, die aus tumorinfiltrierenden B-Zellen (TiBc) generiert wurde, die aus einem primären kolorektalen Karzinom namens HROC59 isoliert wurden. Der Ausgangstumor wurde einem erwachsenen männlichen Patienten mit sporadischem kolorektalem Karzinom der rechten Seite und fortgeschrittenem Krankheitsstadium reseziert. Frisches Tumorgewebe wurde mechanisch dissoziiert, um Einzelzellsuspensionen zu erhalten, und B-Zellen wurden in vitro selektiv mit EBV-haltigem Überstand aus der B95/8-Marmoset-Zelllinie in Gegenwart von Cyclosporin A immortalisiert, um die Expansion von T- und NK-Zellen zu unterdrücken. Die Langzeitkultur führte zu einem stabilen Wachstum einer monoklonalen B-Zellpopulation, wie durch eine Analyse der Immunglobulin-Gen-Umlagerung nachgewiesen wurde.

B-LCL-HROC59 sekretiert Immunglobulin G (IgG) als exklusiven Isotyp, mit stabiler Produktion über eine längere Kultivierungsdauer. In zellbasierten Bindungsassays zeigte IgG aus B-LCL-HROC59 nur eine minimale Bindung an getestete allogene kolorektale Karzinomzelllinien im Vergleich zu anderen TiBc-abgeleiteten IgGs, die eine stärkere Tumorzellreaktivität aufwiesen. Es wurden keine Anzeichen für ein spontanes B-Zell-Wachstum in Abwesenheit von exogenem EBV während der Etablierung der Kultur beobachtet, was darauf hindeutet, dass die Immortalisierung in vitro stattfand und nicht eine latente EBV-bedingte Transformation in vivo widerspiegelte. Als monoklonale, antigenerfahrene tumorinfiltrierende B-Zelllinie bietet B-LCL-HROC59 ein definiertes Modell für die Untersuchung humoraler Immunantworten innerhalb der Mikroumgebung von Darmkrebs und für die Untersuchung der Spezifität und funktionellen Eigenschaften von tumorassoziierten Antikörpern.

37°C, 5%_CO2, befeuchtete Atmosphäre.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

Bei Cytion stehen wir hinter der Qualität und Lebensfähigkeit unserer Produkte. Wir garantieren, dass unsere Zellen zu Beginn der Kultur für 60 Tage nach dem Versand aus unseren Einrichtungen lebensfähig sind. Wir versichern, dass alle Materialien mit den im Analysezertifikat und/oder Produktblatt beschriebenen Spezifikationen übereinstimmen

Ausführliche Informationen finden Sie in unserer <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantieerklärung