B-LCL-HROC59

B-LCL-HROC59 è una linea cellulare linfoblastoide B umana immortalizzata dal virus di Epstein-Barr (EBV) generata da cellule B infiltranti il tumore (TiBc) isolate da un carcinoma colorettale primario denominato HROC59. Il tumore parentale è stato asportato da un paziente maschio adulto affetto da carcinoma colorettale sporadico del lato destro e malattia in stadio avanzato. Il tessuto tumorale fresco è stato dissociato meccanicamente per ottenere sospensioni di cellule singole e le cellule B sono state immortalizzate selettivamente in vitro utilizzando il supernatante contenente EBV derivato dalla linea cellulare B95/8 marmoset in presenza di ciclosporina A per sopprimere l'espansione delle cellule T e NK. La coltura a lungo termine ha portato alla crescita stabile di una popolazione di cellule B monoclonali, come dimostrato dall'analisi del riarrangiamento del gene dell'immunoglobulina.

B-LCL-HROC59 secerne immunoglobulina G (IgG) come suo isotipo esclusivo, con produzione stabile durante la coltura prolungata. Nei test di legame basati sulle cellule, l'IgG derivata da B-LCL-HROC59 ha dimostrato solo un legame minimo con le linee cellulari di carcinoma colorettale allogenico testate rispetto ad altre IgG derivate da TiBc che mostrano una reattività più forte alle cellule tumorali. Non è stata osservata alcuna evidenza di crescita spontanea delle cellule B in assenza di EBV esogeno durante l'inoculo della coltura, indicando che l'immortalizzazione è avvenuta in vitro piuttosto che riflettere una trasformazione latente indotta dall'EBV in vivo. In quanto linea cellulare B monoclonale, esperta di antigeni e infiltrata nel tumore, B-LCL-HROC59 fornisce un modello definito per lo studio delle risposte immunitarie umorali all'interno del microambiente del cancro colorettale e per l'indagine della specificità e delle proprietà funzionali degli anticorpi associati al tumore.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia