B-LCL-HROC59

B-LCL-HROC59 es una línea celular linfoblastoide B humana inmortalizada por el virus de Epstein-Barr (VEB), generada a partir de células B infiltrantes de tumor (TiBc) aisladas de un carcinoma colorrectal primario denominado HROC59. El tumor original se extirpó de un paciente adulto del sexo masculino con carcinoma colorrectal esporádico del lado derecho y enfermedad en etapa avanzada. El tejido tumoral fresco se disoció mecánicamente para obtener suspensiones de células individuales, y las células B se inmortalizaron selectivamente in vitro utilizando sobrenadante que contenía VEB, derivado de la línea celular de marmoseta B95/8, en presencia de ciclosporina A para suprimir la expansión de las células T y NK. El cultivo a largo plazo dio lugar al crecimiento estable de una población monoclonal de células B, como lo demostró el análisis de reordenamiento de genes de inmunoglobulina.

La B-LCL-HROC59 secreta inmunoglobulina G (IgG) como su isotipo exclusivo, con una producción estable durante el cultivo prolongado. En ensayos de unión basados en células, la IgG derivada de B-LCL-HROC59 demostró solo una unión mínima a las líneas celulares de carcinoma colorrectal alogénico analizadas, en comparación con otras IgG derivadas de TiBc que exhibieron una mayor reactividad frente a las células tumorales. No se observó evidencia de crecimiento espontáneo de células B en ausencia de VEB exógeno durante el establecimiento del cultivo, lo que indica que la inmortalización ocurrió in vitro y no refleja una transformación impulsada por el VEB latente in vivo. Como línea celular de células B monoclonales, expuestas a antígenos e infiltrantes de tumores, B-LCL-HROC59 proporciona un modelo definido para estudiar las respuestas inmunitarias humorales dentro del microambiente del cáncer colorrectal y para investigar la especificidad y las propiedades funcionales de los anticuerpos asociados a tumores.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.