B-LCL-HROC59

A B-LCL-HROC59 egy Epstein-Barr vírus (EBV) által immortálisított humán B-limfoblasztos sejtvonal, amelyet HROC59 nevű primer kolorektális karcinómából izolált tumorbehatoló B-sejtekből (TiBc) hoztak létre. A szülői tumort egy jobb oldali sporadikus kolorektális karcinómában szenvedő, előrehaladott stádiumú felnőtt férfi betegtől reszekálták. A friss tumor szövetet mechanikusan szétválasztották, hogy egysejtű szuszpenziót kapjanak, és a B sejteket szelektíven immortálisították in vitro, EBV-t tartalmazó felülúszó folyadékot használva, amelyet a B95/8 marmoset sejtvonalból nyertek ki, ciklosporin A jelenlétében, hogy elnyomják a T- és NK-sejtek szaporodását. A hosszú távú tenyésztés eredményeként stabil monoklonális B-sejt populáció jött létre, amit az immunglobulin gén átrendeződés elemzése is igazolt.

A B-LCL-HROC59 kizárólag immunglobulin G (IgG) izotípust szekretál, amelynek termelése hosszan tartó tenyésztés során is stabil marad. Sejtalapú kötődési vizsgálatokban a B-LCL-HROC59-ből származó IgG csak minimális kötődést mutatott a vizsgált allogén kolorektális karcinóma sejtvonalakhoz képest, szemben más TiBc-ből származó IgG-kkel, amelyek erősebb tumorsejt-reaktivitást mutattak. A tenyésztés során exogén EBV hiányában nem figyeltek meg spontán B-sejt-szaporodást, ami arra utal, hogy az immortalizáció in vitro történt, és nem az in vivo EBV által kiváltott látens transzformációt tükrözi. Monoklonális, antigénnel tapasztalt tumorba beszivárgó B-sejt vonalként a B-LCL-HROC59 meghatározott modellt nyújt a kolorektális rák mikrokörnyezetében zajló humorális immunválaszok tanulmányozásához, valamint a tumorral kapcsolatos antitestek specifitásának és funkcionális tulajdonságainak vizsgálatához.

37°C, 5%_CO2, párásított légkör.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak

A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban