Milieu 199, p/v : 2,7 mM de glutamine stable, p/v : 2,2 g/L de NaHCO₃, p/v : EBSS

Le milieu 199 est un milieu de culture cellulaire polyvalent et largement utilisé, spécialement formulé pour la culture d'explants primaires. Ce milieu complet associe des vitamines essentielles, des acides aminés et d'autres facteurs afin de fournir une source nutritive entièrement définie à divers types de cellules. Il est particulièrement adapté aux cellules non transformées, ce qui en fait un outil précieux pour la recherche biologique.

Le milieu 199 offre un large éventail d'applications sur le terrain. Il permet de maintenir efficacement le complexe cumulus-ovocyte (COC) et favorise la maturation in vitro des ovocytes. De plus, il est utilisé pour le rinçage des canules d’aspiration lors du prélèvement d’ovules chez les vaches Holstein allemandes. Par ailleurs, le milieu 199 constitue un excellent milieu pour la culture de cellules endothéliales cardiaques issues de rats. Ces applications démontrent la polyvalence et l’adaptabilité du milieu 199 à divers besoins expérimentaux.

Historique

Le développement du milieu 199 dans les années 1950 a marqué une avancée significative dans le domaine des milieux de culture tissulaire. Avant son introduction, de nombreux milieux de culture reposaient sur des produits d’origine animale et des extraits tissulaires. Cependant, Morgan et ses collègues ont révolutionné le domaine en formulant une source nutritionnelle entièrement définie pour les cultures cellulaires. Grâce à leurs expériences portant sur différentes combinaisons de vitamines, d’acides aminés et d’autres facteurs, ils ont découvert les propriétés exceptionnelles du milieu 199 en matière de stimulation de la croissance.

Contrôle qualité

• pH = 7,2 ± 0,02 à 20-25 °C. 
• Chaque lot a été testé pour vérifier sa stérilité et l’absence de mycoplasmes et de bactéries.

Conservation  

• Conserver au réfrigérateur entre +2 °C et +8 °C, à l’abri de la lumière. La congélation et le réchauffage jusqu’à +37 °C altèrent la qualité du produit. 
• Ne pas chauffer le milieu à plus de 37 °C ni utiliser de sources de chaleur non contrôlables (par exemple, un four à micro-ondes). 
• Si seule une partie du milieu doit être utilisée, prélevez cette quantité du flacon et réchauffez-la à température ambiante.
• La durée de conservation de tous les milieux, à l’exception du milieu de base, est de 8 semaines à compter de la date de fabrication.

Composition

	Composants	mg/L
Sels inorganiques	Chlorure de calcium x 2H₂O	264,92
	Nitrate de fer (III) x 9H₂O	0,72
	Sulfate de magnésium	97,67
	Chlorure de potassium	400,00
	Acétate de sodium x 3H₂O	82,95
	Chlorure de sodium	6 800,00
	Dihydrogénophosphate de sodium x H₂O	140,00
Autres composants	Sulfate d'adénine	10,00
	AMP	0,20
	ATP	1,00
	Cholestérol	0,20
	2'-désoxyribose	0,50
	D(+)-Glucose anhydre	1 000,00
	Glutathion (réduit)	0,05
	Guanine x HCl	0,30
	Hypoxanthine	0,30
	Rouge de phénol	10,00
	D-ribose	0,50
	Thymine	0,30
	Tween 80	4,90
	Uracile	0,30
	Xanthine	0,30
	NaHCO₃	2 200,00
Acides aminés	L-alanine	25,00
	L-arginine x HCl	70,00
	Acide L-aspartique	30,00
	L-cystéine x HCl x H₂O	0,10
	L-cystine	20,00
	L-glutamine stable	149,00
	Acide L-glutamique	67,00
	Glycine	50,00
	L-histidine x HCl x H₂O	21,88
	L-hydroxyproline	10,00
	L-isoleucine	20,00
	L-leucine	60,00
	L-lysine x HCl	70,00
	L-méthionine	15,00
	L-phénylalanine	25,00
	L-proline	40,00
	L-sérine	25,00
	L-thréonine	30,00
	L-tryptophane	10,00
	L-tyrosine	40,00
	L-valine	25,00
Vitamines	Acide 4-aminobenzoïque	0,05
	Acide ascorbique	0,05
	D(+)-biotine	0,01
	Calciférol	0,10
	D-pantothénate de calcium	0,01
	Chlorure de choline	0,50
	Acide folique	0,01
	Myo-inositol	0,05
	Ménadione	0,01
	Acide nicotinique	0,025
	Nicotinamide	0,025
	Pyridoxal x HCl	0,025
	Pyridoxol x HCl	0,025
	Riboflavine	0,01
	Sel disodique du phosphate de DL-α-tocophérol	0,01
	Thiamine x HCl	0,01
	Acétate de vitamine A	0,14