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Cellule GCT
Tessuto
Polmone
Malattia
Sarcoma pleomorfo indifferenziato
Sito metastatico
Versamento pleurico
Sinonimi
Giant Cell Tumor

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Cellule GCT

Cell line · Codice prodotto 300155

La linea cellulare GCT, derivata da un tumore a cellule giganti (GCT) isolato dal polmone di un paziente maschio adulto affetto da istiocitoma fibroso, è nota per...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare GCT, originata da un tumore a cellule giganti (GCT) isolato dal polmone di un paziente maschio adulto affetto da istiocitoma fibroso, è nota per la sua robusta attività biologica nel campo della ricerca medica. Questa linea produce l'attività stimolante delle colonie (CSA) per i precursori dei granulociti umani e l'attività eritroide simile all'eritropoietina (EEA) per i precursori eritroidi, rendendola preziosa per lo studio della regolazione e dello sviluppo delle cellule ematopoietiche. I precursori dei granulociti e degli eritroidi, cui sono destinati i prodotti della linea cellulare GCT, sono fondamentali per comprendere processi come la funzione dei neutrofili nella risposta immunitaria e la formazione dei globuli rossi, rispettivamente.

Inoltre, il terreno condizionato da questa linea cellulare è una fonte significativa di prostaglandina E e attivatore del plasminogeno. Queste sostanze hanno un ruolo cruciale rispettivamente nella risposta infiammatoria e nella via fibrinolitica. La prostaglandina E è essenziale per la modulazione dell'infiammazione e il mantenimento dell'equilibrio fisiologico, mentre l'attivatore del plasminogeno contribuisce alla dissoluzione dei coaguli di sangue. La presenza di questi fattori nel mezzo condizionato della linea cellulare GCT sottolinea il suo potenziale per lo sviluppo di strategie terapeutiche che affrontino le malattie cardiovascolari e le condizioni legate all'eccessiva formazione di coaguli e all'infiammazione.

Tessuto
Polmone
Malattia
Sarcoma pleomorfo indifferenziato
Sito metastatico
Versamento pleurico
Sinonimi
  • Giant Cell Tumor

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Identificatori

Riferimento bibliografico
GCT (numero di catalogo Cytion 300155)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1229

04Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glucosio, w: Glutammina stabile, w: 2,0 mM Sodio piruvato, w: 2,2 g/L NaHCO3 (articolo Cytion numero 820200a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
Da 1 a 2 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

06Donatore

Età dei donatori
29 anni