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Células GCT
Tecido
Pulmão
Doença
Sarcoma pleomórfico indiferenciado
Local da metástase
Derrame pleural
Sinónimos
Giant Cell Tumor

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Células GCT

Cell line · Número do produto 300155

A linha celular GCT, originária de um tumor de células gigantes (GCT) isolado do pulmão de um doente adulto do sexo masculino com histiocitoma fibroso, é conhecida pela sua...

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01Informações gerais

Descrição

A linha celular GCT, originária de um tumor de células gigantes (GCT) isolado do pulmão de um doente adulto do sexo masculino com histiocitoma fibroso, é conhecida pela sua atividade biológica robusta no domínio da investigação médica. Esta linha produz Atividade Estimuladora de Colónias (CSA) para precursores de granulócitos humanos e Atividade Eritroide Semelhante à Eritropoietina (EEA) para precursores eritróides, o que a torna inestimável para o estudo da regulação e desenvolvimento de células hematopoiéticas. Os precursores granulócitos e eritróides visados pelos produtos da linha celular GCT são fundamentais para compreender processos como a função dos neutrófilos na resposta imunitária e a formação de glóbulos vermelhos, respetivamente.

Além disso, o meio condicionado por esta linha celular é uma fonte significativa de prostaglandina E e de ativador do plasminogénio. Estas substâncias têm papéis cruciais nas respostas inflamatórias e na via fibrinolítica, respetivamente. A prostaglandina E é essencial para a modulação inflamatória e a manutenção do equilíbrio fisiológico, enquanto o ativador do plasminogénio contribui para a dissolução de coágulos sanguíneos. A presença destes factores no meio condicionado da linha celular GCT realça o seu potencial para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas para doenças cardiovasculares e condições relacionadas com a formação excessiva de coágulos e inflamação.

Tecido
Pulmão
Doença
Sarcoma pleomórfico indiferenciado
Local da metástase
Derrame pleural
Sinónimos
  • Giant Cell Tumor

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Masculino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Identificadores

Referência
GCT (número de catálogo Cytion 300155)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1229

04Manuseamento e cultura

Meio de cultura
McCoys 5a, com: 3,0 g/L de glucose, com: glutamina estável, com: 2,0 mM de piruvato de sódio, com: 2,2 g/L de NaHCO3 (número de artigo Cytion 820200a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
1 a 2 x 104 células/cm2
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento
Após o descongelamento, coloque as células em placas a uma densidade de 5 x 104 células/cm² e deixe-as recuperar do processo de congelamento e aderir durante pelo menos 24 horas.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

06Doador

Idade do dador
29 anos