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HCC94
Tessuto
Cervice
Malattia
Carcinoma a cellule squamose
Sinonimi
HCC-94, HCC 94, HCC941122

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HCC94

Cell line · Codice prodotto 305462

La linea cellulare HCC94 è un modello utilizzato per lo studio del cancro cervicale, una patologia comunemente associata all'infezione da papillomavirus umano (HPV). Questa linea cellulare presenta...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare HCC94 è un modello utilizzato per lo studio del cancro cervicale, una patologia comunemente associata all’infezione da papillomavirus umano (HPV). Questa linea cellulare ha svolto un ruolo fondamentale nella comprensione dei meccanismi alla base della resistenza alla chemioterapia, in particolare attraverso le vie metaboliche. Studi recenti hanno dimostrato che nelle cellule staminali del cancro cervicale (CSC) derivate dalla linea HCC94, gli enzimi coinvolti nel metabolismo del glicogeno, quali la PCK1 e la glicogeno fosforilasi fosforilata (pPYGL), facilitano la degradazione del glicogeno. Questo processo convoglia il glucosio nella via del pentoso fosfato (PPP), producendo NADPH e favorendo l’eliminazione delle specie reattive dell’ossigeno (ROS). Questo meccanismo contribuisce alla sopravvivenza delle cellule durante la chemioterapia, favorendone così la resistenza.

Ulteriori ricerche hanno dimostrato che l’inibizione di PCK1 nelle CSC di HCC94 può ridurre la produzione di NADPH e compromettere la capacità delle cellule di eliminare i ROS, aumentando la loro sensibilità alla chemioterapia. Questi risultati sottolineano il potenziale di intervenire su vie metaboliche come la PPP e la degradazione del glicogeno come strategie per superare la resistenza ai farmaci nel cancro della cervice uterina. Questa comprensione potrebbe aprire la strada a nuovi approcci terapeutici volti a interferire con i meccanismi di gestione delle ROS per migliorare gli esiti del trattamento nel carcinoma cervicale.

Tessuto
Cervice
Malattia
Carcinoma a cellule squamose
Sinonimi
  • HCC-94
  • HCC 94
  • HCC941122

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Identificatori

Riferimento bibliografico
HCC94 (codice catalogo Cytion 305462)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_6945

04Espressione e suscettibilità

Virus
Trasformante: papillomavirus umano di tipo 16 (HPV16)

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
RPMI 1640, w: 2,0 mM di glutammina stabile, w: 2,0 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820700a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
1-3*10^4/cm²
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Età dei donatori
37 anni