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MR1
Proprietà di crescita
Sospensione
Livello di biosicurezza
1

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MR1

Cell line · Codice prodotto 305000

MR1 è una linea cellulare di ibridomi derivata dalla fusione di cellule della milza con cellule di mieloma NS-1, a seguito dell'immunizzazione di animali con cellule T di topo, pa...

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01Informazioni generali

Descrizione

MR1 è una linea cellulare di ibridoma derivata dalla fusione di cellule della milza con cellule di mieloma NS-1, in seguito all'immunizzazione di animali con cellule T di topo, soprattutto del sottotipo Th1. Queste cellule esprimono immunoglobuline, in particolare anticorpi monoclonali diretti contro il ligando del CD40 di topo (CD154, noto anche come gp39 o CD40L). L'isotipo dell'anticorpo monoclonale prodotto è IgG. Il CD154 è una molecola cruciale coinvolta nelle interazioni con le cellule T, in particolare nell'attivazione delle cellule B, poiché il suo legame con il CD40 sulle cellule B è essenziale per la proliferazione, la differenziazione e la produzione di immunoglobuline. Questo legame influenza anche la costimolazione delle cellule T e la produzione di citochine, rendendo il CD154 un importante bersaglio per l'intervento terapeutico nella modulazione immunitaria.

Gli anticorpi derivati da MR1 mirano specificamente a bloccare l'interazione tra CD154 e CD40, con implicazioni terapeutiche in varie risposte immunitarie. In particolare, gli anticorpi anti-CD154 sono stati utilizzati per indurre la non responsività delle cellule T agli innesti di organi nei trapianti. Bloccando l'interazione CD154-CD40, gli anticorpi MR1 inibiscono l'attivazione delle cellule T e la relativa risposta immunitaria, promuovendo uno stato di tolleranza. Questa strategia è particolarmente preziosa per prevenire il rigetto dell'organo nei riceventi di trapianto, in quanto consente la sopravvivenza a lungo termine dell'innesto senza la necessità di immunosoppressori sistemici, che possono avere ampi effetti collaterali. In modelli sperimentali, gli anticorpi MR1 hanno dimostrato la capacità di prolungare la sopravvivenza degli innesti di isole pancreatiche, il che è significativo per il trattamento del diabete attraverso il trapianto di isole.

Gli anticorpi MR1 sono utilizzati anche nella ricerca sulle malattie autoimmuni, dove l'attivazione inappropriata delle cellule T e B attraverso le interazioni CD40-CD154 svolge un ruolo fondamentale. Inibendo queste interazioni, gli anticorpi MR1 possono contribuire a modulare le risposte immunitarie, rendendoli potenziali candidati per applicazioni terapeutiche al di là dei trapianti, comprese le patologie autoimmuni e alcuni disturbi linfoproliferativi. La letteratura scientifica e brevettuale ha esplorato l'uso di MR1 in varie applicazioni, sottolineando la sua importanza nel campo della regolazione immunitaria e dello sviluppo di anticorpi terapeutici.

02Classificazione

Proprietà di crescita
Sospensione
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Linfoblasto

04Identificatori

Riferimento bibliografico
MR1 (numero di catalogo Cytion 305000)
Codice fiscale NCBI
10090/10032
Cellosaurus
CVCL_8964

05Espressione e suscettibilità

Espressione proteica
Immunoglobulina, anticorpo monoclonale, contro il ligando CD40 di topo (CD154, CD40L, gp39)

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
RPMI 1640, w: 2,0 mM di glutammina stabile, w: 2,0 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820700a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS, 0,05 mM di 2-mercaptoetanolo
Subcoltura
Omogeneizzare delicatamente la sospensione cellulare nel pallone pipettando verso l'alto e verso il basso, quindi prelevare un campione rappresentativo per determinare la densità cellulare per ml. Diluire la sospensione per ottenere una concentrazione cellulare di 1 x 105 cellule/ml con terreno di coltura fresco e aliquotare la sospensione regolata in nuovi palloni per l'ulteriore coltivazione.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.