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Hep-55.1C
Tessuto
Fegato
Malattia
Carcinoma epatocellulare
Sinonimi
HEP-55.1C, 55.1C

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Hep-55.1C

Cell line · Codice prodotto 400201

The Hep-55.1c hepatoma cell line is derived from a mouse liver tumor, specifically from the C57BL/6J mouse strain. This cell line is characterized by its ...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare di epatoma Hep-55.1c è derivata da un tumore del fegato di topo, in particolare dal ceppo di topo C57BL/6J. Questa linea cellulare è caratterizzata dall'origine epatocitaria, confermata dall'analisi delle proteine del filamento intermedio. Hep-55.1c esprime le cheratine semplici K8 e K18, tipiche delle cellule epatiche normali, nonché la vimentina e la cheratina K19 in misura variabile. Questi pattern proteici confermano la natura epatocitaria della linea cellulare e la sua classificazione come linea di epatoma.

La linea cellulare Hep-55.1c mostra una morfologia prevalentemente epiteliale, che riflette la sua origine dagli epatociti. Questo fenotipo morfologico è coerente con il suo profilo di espressione proteica. L'analisi dell'impronta del DNA di Hep-55.1c non ha rivelato alcuna anomalia strutturale di rilievo, indicando un certo grado di stabilità genomica. Tuttavia, sono stati osservati alcuni cambiamenti nell'intensità relativa di bande specifiche con l'aumento del numero di passaggi, suggerendo una piccola variabilità genomica in periodi di coltura prolungati.

Nonostante l'assenza di mutazioni p53 rilevabili nei tumori primari del fegato di topo, sono state riscontrate aberrazioni in alcune linee di epatoma durante la propagazione in vitro. La linea cellulare Hep-55.1c è stata analizzata per le mutazioni nei geni p53 e c-Ha-ras. L'assenza di mutazioni rilevabili nel gene p53 in questa linea durante i primi passaggi suggerisce un background genetico stabile. Questa linea cellulare funge da modello prezioso per lo studio del carcinoma epatocellulare, fornendo approfondimenti sui meccanismi cellulari e molecolari alla base della tumorigenesi epatica.

Tessuto
Fegato
Malattia
Carcinoma epatocellulare
Sinonimi
  • HEP-55.1C
  • 55.1C

02Classificazione

Organismo
Mouse
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tumorigenico
Sì, in topi C57BL/6J

04Identificatori

Riferimento bibliografico
Hep-55.1C (numero di catalogo Cytion 400201)
Codice fiscale NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_5766

05Espressione e suscettibilità

Espressione proteica
Cheratina 8, cheratina 18, vimentina.
Profilo mutazionale
P53 wt

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
Ogni 3-5 giorni
Recupero post-scongelamento
Avviare la coltura dalla crioviala con una densità cellulare compresa tra 3 e 4 x 104 cellule/cm2. Le cellule si riprenderanno entro 24-48 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Razza / sottospecie
C57BL/6J
Età dei donatori
Adulti