OLN-93

OLN-93 to stała linia komórkowa oligodendroglialna wyhodowana z pierwotnych hodowli komórek glejowych mózgu noworodków szczurów. Linia ta pochodzi ze spontanicznie transformowanych komórek w mieszanych hodowlach glejowych i charakteryzuje się zachowaniem stabilnych właściwości oligodendroglialnych przez długi okres hodowli. Komórki OLN-93 namnażają się w sposób ciągły w obecności surowicy, a czas podwojenia wynosi około 16–18 godzin; zachowują one kluczowe cechy zróżnicowanych oligodendrocytów. Analizy immunocytochemiczne i biochemiczne wykazują, że komórki te wyrażają główne markery specyficzne dla mieliny, w tym galaktocebrozyd (GC), białko podstawowe mieliny (MBP), glikoproteinę związaną z mieliną (MAG), białko proteolipidowe (PLP) oraz białko Wolfgrama (WP). Ekspresję PLP i jego alternatywnie splicowanej izoformy DM20 potwierdzono na poziomie mRNA za pomocą RT-PCR.

Co istotne, komórki OLN-93 nie wykazują ekspresji markerów astrocytów, takich jak wimentyna i kwaśne białko włókniste gleju (GFAP), ani markera prekursorów oligodendrocytów A2B5, co wskazuje na zróżnicowany fenotyp, niebędący fenotypem prekursorowym. Pod względem morfologicznym komórki te wykazują wygląd dwubiegunowy w standardowych warunkach hodowli i rozwijają rozgałęzione wypustki, gdy są hodowane w niskiej gęstości lub w środowisku o niskiej zawartości surowicy, przypominając niedojrzałe lub wczesne poporodowe oligodendrocyty. Cechy te sprawiają, że OLN-93 są cennym modelem do badania różnicowania oligodendrocytów, ekspresji białek mieliny oraz interakcji z neuronami lub innymi typami komórek glejowych in vitro.

Komórki OLN-93 zostały również zmodyfikowane genetycznie w celu badania procesów chorób neurodegeneracyjnych. Na przykład, po transfekcji w celu ekspresji ludzkiej α-synukleiny (w tym mutanta A53T) i białka tau, służą one jako model do badania mechanizmów agregacji białek w warunkach stresu. Po ekspozycji na stres oksydacyjny i proteasomalny komórki OLN-93 tworzą agregaty pozytywne w teoflawinie S, które kolokalizują się z α-synukleiną, tau i αB-krystaliną, przypominając wtręty cytoplazmatyczne komórek glejowych obserwowane w synukleinopatiach, takich jak zanik wieloukładowy. Te wywołane stresem zmiany rozpuszczalności białek i składu agregatów podkreślają przydatność OLN-93 jako systemu modelowego do badania proteostazy, biologii białek opiekuńczych oraz odpowiedzi komórkowych oligodendrocytów na patologiczną agregację białek.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym