OLN-93

A OLN-93 é uma linhagem celular oligodendroglial permanente derivada de culturas gliais primárias do cérebro de ratos recém-nascidos. A linhagem celular teve origem em células transformadas espontaneamente em culturas gliais mistas e foi caracterizada por manter propriedades oligodendrogliais estáveis ao longo de períodos prolongados de cultura. As células OLN-93 proliferam continuamente na presença de soro, com um tempo de duplicação de aproximadamente 16 a 18 horas, e mantêm características-chave dos oligodendrócitos diferenciados. Análises imunocitoquímicas e bioquímicas demonstram que essas células expressam os principais marcadores específicos da mielina, incluindo galactocerebrosídeo (GC), proteína básica da mielina (MBP), glicoproteína associada à mielina (MAG), proteína proteolipídica (PLP) e proteína de Wolfgram (WP). A expressão da PLP e de sua isoforma DM20, resultante de splicing alternativo, foi confirmada no nível do mRNA por meio de RT-PCR.

É importante ressaltar que as células OLN-93 não expressam os marcadores astrocíticos vimentina e proteína ácida fibrilar glial (GFAP), nem o marcador de precursores de oligodendrócitos A2B5, indicando um fenótipo diferenciado, não precursor. Morfologicamente, as células apresentam uma aparência bipolar em condições padrão de cultura e desenvolvem processos arborizados quando cultivadas em baixa densidade ou em ambientes com baixo teor de soro, assemelhando-se a oligodendrócitos imaturos ou no estágio pós-natal inicial. Essas características tornam as células OLN-93 um modelo valioso para o estudo da diferenciação de oligodendrócitos, da expressão de proteínas da mielina e das interações com neurônios ou outros tipos de células gliais in vitro.

As células OLN-93 também foram geneticamente modificadas para o estudo de processos de doenças neurodegenerativas. Por exemplo, quando transfectadas para expressar a α-sinucleína humana (incluindo a mutante A53T) e a proteína tau, elas servem como modelo para investigar mecanismos de agregação proteica sob estresse. Quando expostas ao estresse oxidativo e proteossômico, as células OLN-93 formam agregados positivos para tioflavina S que se co-localizam com a α-sinucleína, a proteína tau e a αB-cristalina, assemelhando-se às inclusões citoplasmáticas gliais observadas em sinucleinopatias, como a atrofia multissistêmica. Essas alterações induzidas pelo estresse na solubilidade das proteínas e na composição dos agregados ressaltam a utilidade das células OLN-93 como um sistema-modelo para explorar a proteostase, a biologia das proteínas chaperonas e as respostas celulares dos oligodendrócitos à agregação patológica de proteínas.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.