OLN-93

OLN-93 on pysyvä oligodendroglia-solulinja, joka on peräisin vastasyntyneen rotan aivojen primaarisista glia-viljelmistä. Solulinja on peräisin sekaglia-viljelmien spontaanisti transformoituneista soluista, ja sen on todettu säilyttävän vakaat oligodendroglia-ominaisuudet pitkillä viljelyjaksoilla. OLN-93-solut lisääntyvät jatkuvasti seerumin läsnä ollessa, ja niiden kaksinkertaistumisaika on noin 16–18 tuntia, ja ne säilyttävät erilaistuneiden oligodendrosyyttien keskeiset ominaisuudet. Immunosytokemialliset ja biokemialliset analyysit osoittavat, että nämä solut ilmentävät tärkeimpiä myeliinispesifisiä markkereita, kuten galaktoserebrosidia (GC), myeliinin perusproteiinia (MBP), myeliiniin liittyvää glykoproteiinia (MAG), proteolipidiproteiinia (PLP) ja Wolfgram-proteiinia (WP). PLP:n ja sen vaihtoehtoisesti silmukoitujen isoformien DM20 ilmentyminen on vahvistettu mRNA-tasolla RT-PCR:n avulla.

Tärkeää on, että OLN-93-solut eivät ilmentä astrosyyttimarkkereita vimentiiniä ja gliafibrillaarista happoproteiinia (GFAP) eivätkä oligodendrosyyttien esiasteen markkeria A2B5, mikä viittaa erilaistuneeseen, ei-esiasteen fenotyyppiin. Morfologisesti solut näyttävät kaksipolvisilta tavallisissa viljelyolosuhteissa ja kehittävät puumaisia ulokkeita, kun niitä kasvatetaan matalassa tiheydessä tai vähäseerumisissa ympäristöissä, muistuttaen epäkypsiä tai varhaisia synnytyksen jälkeisiä oligodendrosyyttejä. Nämä ominaisuudet tekevät OLN-93:sta arvokkaan mallin oligodendrosyyttien erilaistumisen, myeliiniproteiinin ilmentymisen sekä vuorovaikutusten neuronien tai muiden glia-solutyyppien kanssa in vitro -tutkimiseen.

OLN-93-soluja on myös muunnettu geneettisesti neurodegeneratiivisten sairauksien prosessien tutkimiseksi. Esimerkiksi, kun ne transfektoidaan ilmentämään ihmisen α-synukleiinia (mukaan lukien A53T-mutaatio) ja tau-proteiinia, ne toimivat mallina stressin alla tapahtuvan proteiiniaggregaation mekanismien tutkimiseen. Altistuessaan oksidatiiviselle ja proteasomaaliselle stressille OLN-93-solut muodostavat tioflaviini S-positiivisia aggregaatteja, jotka lokalisoituvat yhdessä α-synukleiinin, tau-proteiinin ja αB-kristalliinin kanssa, muistuttaen glia-sytoplasman inkluusioita, joita nähdään synukleiinopatioissa, kuten monisysteemiatrofiassa. Nämä stressin aiheuttamat muutokset proteiinien liukoisuudessa ja aggregaattien koostumuksessa korostavat OLN-93:n hyödyllisyyttä mallijärjestelmänä proteostaasin, kaperonibiologian ja oligodendrosyyttien soluvasteiden tutkimisessa patologiseen proteiiniaggregaatioon.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa