OLN-93

OLN-93 on püsiv oligodendrogliaalsete rakkude liin, mis on saadud vastsündinud roti aju esmasest gliaalkultuurist. See rakuliin pärineb segaglialkultuurides spontaanselt transformeerunud rakkudest ning selle puhul on täheldatud, et see säilitab pikaajalise kultiveerimise jooksul stabiilsed oligodendrogliaalsed omadused. OLN-93 rakud paljunevad pidevalt seerumi juuresolekul, kahekordistumisaeg on umbes 16–18 tundi, ning säilitavad diferentseerunud oligodendrotsüütide põhiomadused. Immunotsütokeemilised ja biokeemilised analüüsid näitavad, et need rakud ekspresseerivad peamisi müeliinispetsiifilisi markereid, sealhulgas galaktotserebrosiidi (GC), müeliini põhilist valku (MBP), müeliiniga seotud glükoproteiini (MAG), proteolipiidvalku (PLP) ja Wolfgrami valku (WP). PLP ja selle alternatiivselt splaissitud isoformi DM20 ekspressioon on kinnitatud mRNA tasandil RT-PCR-i abil.

Oluline on see, et OLN-93 rakud ei ekspressi astrotsüütide markereid vimentiini ja gliaalset fibrillaarset happelist valku (GFAP) ega oligodendrotsüütide eellaste markeri A2B5, mis viitab diferentseeritud, mitte-eellaste fenotüübile. Morfoloogiliselt näitavad rakud standardsetes kultiveerimistingimustes bipolaarset välimust ja arendavad hargnenud protsesse, kui neid kasvatatakse madalas tiheduses või madala seerumisisaldusega keskkondades, meenutades ebaküpset või varajast postnataalset oligodendrotsüüti. Need omadused teevad OLN-93-st väärtusliku mudeli oligodendrotsüütide diferentseerumise, müeliinvalgu ekspressiooni ja interaktsioonide uurimiseks neuronite või teiste gliaalsete rakutüüpidega in vitro.

OLN-93 rakke on ka geneetiliselt muundatud neurodegeneratiivsete haiguste protsesside uurimiseks. Näiteks, kui neid transfekteeritakse inimese α-sünukleiini (sh A53T-mutant) ja tau-valgu ekspresseerimiseks, toimivad need mudelina valkude agregatsiooni mehhanismide uurimiseks stressi tingimustes. Oksüdatiivse ja proteasoomse stressi mõjul moodustavad OLN-93 rakud tioflaviin S-positiivseid agregaate, mis asuvad samas kohas α-sünukleiini, tau ja αB-kristalliiniga, meenutades gliaalsete tsütoplasma inkluusioone, mida on täheldatud sünukleiinopaatiate, nagu mitme süsteemi atroofia, puhul. Need stressist tingitud muutused valkude lahustuvuses ja agregaatide koostises rõhutavad OLN-93 kasulikkust mudelisüsteemina proteostaasi, šaperonide bioloogia ja oligodendrotsüütide rakuliste reaktsioonide uurimiseks patoloogilisele valkude agregatsioonile.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest