OLN-93

OLN-93 è una linea cellulare oligodendrogliale permanente derivata da colture gliali primarie di cervello di ratto neonato. La linea cellulare ha avuto origine da cellule trasformate spontaneamente in colture gliali miste ed è stata caratterizzata per il mantenimento di proprietà oligodendrogliali stabili durante periodi di coltura prolungati. Le cellule OLN-93 proliferano continuamente in presenza di siero, con un tempo di raddoppio di circa 16-18 ore, e conservano le caratteristiche chiave degli oligodendrociti differenziati. Analisi immunocitochimiche e biochimiche dimostrano che queste cellule esprimono i principali marcatori specifici della mielina, tra cui il galattocerebroside (GC), la proteina basica della mielina (MBP), la glicoproteina associata alla mielina (MAG), la proteina proteolipidica (PLP) e la proteina di Wolfgram (WP). L'espressione della PLP e della sua isoforma DM20, ottenuta tramite splicing alternativo, è stata confermata a livello di mRNA mediante RT-PCR.

È importante sottolineare che le cellule OLN-93 non esprimono i marcatori astrocitici vimentina e proteina acida fibrillare gliale (GFAP), né il marcatore dei precursori degli oligodendrociti A2B5, indicando un fenotipo differenziato e non precursore. Dal punto di vista morfologico, le cellule presentano un aspetto bipolare in condizioni di coltura standard e sviluppano processi ramificati quando coltivate a bassa densità o in ambienti a basso contenuto di siero, assomigliando a oligodendrociti immaturi o in fase postnatale precoce. Queste caratteristiche rendono le OLN-93 un modello prezioso per lo studio della differenziazione degli oligodendrociti, dell'espressione delle proteine della mielina e delle interazioni con i neuroni o altri tipi di cellule gliali in vitro.

Le cellule OLN-93 sono state inoltre geneticamente modificate per studiare i processi delle malattie neurodegenerative. Ad esempio, quando trasfettate per esprimere l'α-sinucleina umana (inclusa la mutazione A53T) e la proteina tau, fungono da modello per indagare i meccanismi di aggregazione proteica in condizioni di stress. Se esposte a stress ossidativo e proteasomico, le cellule OLN-93 formano aggregati positivi alla tioflavina S che si localizzano insieme all'α-sinucleina, alla proteina tau e alla αB-cristallina, assomigliando alle inclusioni citoplasmatiche gliali osservate nelle sinucleinopatie come l'atrofia multisistemica. Questi cambiamenti indotti dallo stress nella solubilità delle proteine e nella composizione degli aggregati sottolineano l'utilità delle OLN-93 come sistema modello per esplorare la proteostasi, la biologia delle chaperone e le risposte cellulari degli oligodendrociti all'aggregazione proteica patologica.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia