B-LCL-HROC57

La lignée cellulaire B-LCL-HROC57 est une lignée de lymphoblastes B humains immortalisée par le virus d’Epstein-Barr (VEB), établie à partir de lymphocytes B infiltrant la tumeur (TiBc) isolés d’un carcinome colorectal primaire désigné HROC57. La tumeur d’origine provenait d’un patient adulte de sexe masculin atteint d’un carcinome colorectal du côté droit présentant une différenciation neuroendocrine et un stade avancé de la maladie. Le tissu tumoral frais a été dissocié mécaniquement pour obtenir des suspensions de cellules individuelles, et les cellules B ont été immortalisées de manière sélective in vitro à l’aide d’un surnageant contenant l’EBV, dérivé de la lignée cellulaire de marmouset B95/8, en présence de cyclosporine A afin d’inhiber la prolifération des cellules T et des cellules NK. Une expansion à long terme a permis d’obtenir une culture stable de cellules B monoclonales, comme l’a confirmé l’analyse du réarrangement des gènes d’immunoglobulines.

La lignée B-LCL-HROC57 sécrète exclusivement de l’immunoglobuline G (IgG), dont la production reste stable au cours d’une culture prolongée. Dans les essais de liaison cellulaires, l’IgG dérivée de B-LCL-HROC57 présente une liaison mesurable aux lignées cellulaires de carcinome colorectal allogéniques, avec une intensité de liaison intermédiaire par rapport aux autres IgG dérivées de TiBc. Les analyses par immunofluorescence indiquent une reconnaissance de la cible principalement intracellulaire dans les cellules tumorales. Aucune prolifération spontanée de cellules B ne se produit en l’absence d’EBV exogène lors de l’établissement de la culture, ce qui exclut une transformation in vivo induite par l’EBV latent. En tant que lignée de cellules B monoclonales, ayant déjà été exposées à des antigènes et infiltrant la tumeur, la lignée B-LCL-HROC57 constitue un modèle bien défini pour l’étude des réponses immunitaires humorales dans le carcinome colorectal et pour l’identification des antigènes associés à la tumeur reconnus par des clones de cellules B multipliés localement.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.