B-LCL-HROC57

B-LCL-HROC57 es una línea celular linfoblastoide B humana inmortalizada por el virus de Epstein-Barr (VEB) establecida a partir de células B infiltrantes tumorales (TiBc) aisladas de un carcinoma colorrectal primario denominado HROC57. El tumor parental se originó en un paciente adulto varón con carcinoma colorrectal del lado derecho que presentaba diferenciación neuroendocrina y enfermedad en estadio avanzado. El tejido tumoral fresco se disoció mecánicamente para obtener suspensiones de células individuales, y las células B se inmortalizaron selectivamente in vitro utilizando sobrenadante que contenía EBV derivado de la línea celular B95/8 de tití en presencia de ciclosporina A para inhibir el crecimiento de células T y NK. La expansión a largo plazo produjo un cultivo estable de células B monoclonales, como se confirmó mediante el análisis de reordenamiento del gen de la inmunoglobulina.

B-LCL-HROC57 secreta inmunoglobulina G (IgG) como su isotipo exclusivo, con una producción estable durante un cultivo prolongado. En ensayos de unión basados en células, la IgG derivada de B-LCL-HROC57 muestra una unión medible a líneas celulares de carcinoma colorrectal alogénico, con una intensidad de unión intermedia en relación con otras IgG derivadas de TiBc. Los análisis de inmunofluorescencia indican un reconocimiento predominantemente intracelular de la diana en las células tumorales. No se produce un crecimiento espontáneo de células B en ausencia de VEB exógeno durante el establecimiento del cultivo, lo que excluye la transformación latente impulsada por el VEB in vivo. Como línea celular B monoclonal infiltrada en tumores con experiencia antigénica, B-LCL-HROC57 representa un modelo definido para investigar las respuestas inmunitarias humorales en el carcinoma colorrectal y para identificar antígenos asociados a tumores reconocidos por clones de células B expandidos localmente.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

Para más información, consulte nuestra <a href=""/Quiénes somos/Garantía/"" hreflang=""x-default"">Declaración de garantía