01General information
- Description
קו התאים DC2.4 הוא קו תאים דנדריטיים של עכבר שהפך לבלתי מתכלה, שמקורו במח העצם. הוא משמש בדרך כלל לחקר הביולוגיה של תאים דנדריטיים (DC), תגובות חיסוניות ופיתוח טיפולים אימונולוגיים. תאי DC2.4 מאופיינים בתפקידם כתאים מציגי אנטיגן (APC) וידועים כבעלי סמנים אופייניים לתאי דנדריטים, כגון CD11c ומולקולות MHC מסוג I. עם זאת, הם מציגים פנוטיפ לא בוגר בתנאי תרבית סטנדרטיים, עם ביטוי נמוך של MHC class II ומולקולות קוסטמולטוריות כמו CD40 ו-CD80. זה הופך אותם לשימושיים לחקר המנגנונים והגירויים הדרושים להתבגרות DC ולתפקודי החיסון שלהם לאחר מכן.
מחקרים הראו שגירויים ספציפיים יכולים לגרום להתבגרות של תאי DC2.4. ראוי לציין שחשיפה לאינטרפרון-גאמא (IFN-γ) מובילה לעלייה משמעותית בביטוי של MHC class II, CD40, CD80 ו-CCR7, וכן לעלייה בהפרשת ציטוקינים, כולל IL-6, IL-12 ו-TNF-α. תאים DC2.4 שהבשילו באמצעות IFN-γ הוכחו כפעילים ביעילות בהפעלת תאי T ציטוטוקסיים CD8+ הן במבחנה והן in vivo, ובכך משפרים את החיסון נגד גידולים. לדוגמה, תאים DC2.4 שטופלו ב-IFN-γ וקיבלו פולסים של אנטיגן הוכחו כמעוררים תגובות חזקות של תאי T CD8+ ומספקים הגנה אנטי-סרטנית במודלים של עכברים. דבר זה מדגיש את התועלת של קו התאים במחקר אימונותרפיה לסרטן ובפיתוח חיסונים.
בנוסף, תאי DC2.4 שימשו לחקר האינטראקציות בין מארח לפתוגן, שכן תגובתם לאתגרים חיסוניים שונים יכולה לחקות היבטים של הפעלת המערכת החיסונית המולדת. הניתוח של פרופילי miRNA אקסוזומליים מתאי DC2.4, במיוחד כאשר הם נגועים בפתוגנים כמו Toxoplasma gondii, סיפק תובנות על המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס איתות תאי דנדריטים ותקשורת חיסונית. הביטוי הדיפרנציאלי של miRNA אקסוזומליים בתגובה לזיהום מצביע על תפקידים פוטנציאליים בוויסות החיסון של המארח ומדגיש את השימושיות של DC2.4 במחקר חיסוני מבוסס אקסוזומים ו-RNA.
- Tissue
- מח עצם
- Synonyms
- DC 2.4
02Classification
- Organism
- Mouse
- Sex
- Unspecified
- Growth properties
- Adherent
- GMO status
- GMO-S1
- GMO status details
- GMO-S1: This murine dendritic cell line (DC2.4) contains retroviral constructs encoding murine GM-CSF, v-myc and v-raf introduced by transduction, supporting transformation and growth. The inserts are stably present in the dendritic cell-derived line. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Cell type
- תא דנדריטי
04Identifiers
- Citation
- DC2.4 (מספר קטלוגי Cytion 305515)
- NCBI TaxID
- 10090
- Cellosaurus
- CVCL_J409
05Expression and susceptibility
- Viruses
- טרנספורמנט: רטרו-וירוס רקומביננטי J2
06Handling and culture
- Culture medium
- RPMI 1640, w: 2.0 mM גלוטמין יציב, w: 2.0 g/L NaHCO3 (מספר קטלוגי של Cytion 820700a)
- Incubation atmosphere
37°C, 5%CO2, אווירה לחה.
- Supplements
- יש להוסיף למדיום 10% FBS, 1% NEAA ו-10 מ"מ HEPES
- Dissociation reagent
- אקוטאז
- Subculturing
- הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.
כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.
- Freeze medium
- כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
- Storage conditions
לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.
- Shipping conditions
שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
08Donor
- Breed / subspecies
- C57BL/6
- Donor age
- לא צוין
09Legal and safety
- Safety precautions
- כאשר מתכננים לאחסן קריוביאל בחנקן נוזלי להפשרה עתידית, חובה להקפיד על אמצעי בטיחות מחמירים. יש להקפיד על שימוש בכפפות ובבגדים מגנים מתאימים, וכן על שימוש במסכת פנים או משקפי מגן בעת העברת דגימות קפואות אל מיכל החנקן הנוזלי או ממנו. זאת כדי להפחית את הסיכון לפציעה כתוצאה מפיצוץ אפשרי של הקריוביאל בעת הוצאתו, העלול לגרום להתזת רסיסים חדים.
- Warranty
ב-Cytion, אנו עומדים מאחורי האיכות והכדאיות של המוצרים שלנו. אנו מבטיחים שתאינו יהיו קיימים בתחילת התרבית למשך 60 יום לאחר המשלוח מהמתקנים שלנו. אנו מבטיחים שכל החומרים תואמים למפרטים המתוארים בתעודת הניתוח ו/או בדף המוצר.
לפרטים מלאים, אנא עיינו ב <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">הצהרת האחריות שלנו
- Material Transfer Agreement required
- Yes
