Pāriet uz saturu
DC2.4
Audums
Kaulu smadzenes
Sinonīmi
DC 2.4

Dokumenti

DC2.4

Cell line · Preces numurs 305515

DC2.4 šūnu līnija ir nemirstīga peles dendrīto šūnu līnija, kas iegūta no kaulu smadzenēm. To parasti izmanto, lai pētītu dendrīto šūnu (DC) bioloģiju...

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

DC2.4 šūnu līnija ir imortizēta peļu dendrītisko šūnu līnija, kas iegūta no kaulu smadzenēm. To parasti izmanto dendrītisko šūnu (DC) bioloģijas, imūnās atbildes reakcijas un imūnterapijas izstrādes pētījumiem. DC2.4 šūnas raksturo to kā antigēnu pārstāvošās šūnas (APC), un ir zināms, ka tās ekspresē dendrītiskajām šūnām raksturīgos virsmas marķierus, piemēram, CD11c un MHC I klases molekulas. Tomēr standarta kultūras apstākļos tām piemīt nenobriedis fenotips ar zemu MHC II klases un kostimulācijas molekulu, piemēram, CD40 un CD80, ekspresiju. Tāpēc tās ir noderīgas, lai pētītu mehānismus un stimulus, kas nepieciešami DC nobriešanai un to turpmākajām imūnajām funkcijām.

Pētījumi liecina, ka specifiski stimuli var izraisīt DC2.4 šūnu nobriešanu. Īpaši interferona gamma (IFN-γ) iedarbība izraisa ievērojamu MHC II klases, CD40, CD80 un CCR7, kā arī paaugstinātu citokīnu, tostarp IL-6, IL-12 un TNF-α, sekrēciju. Ir pierādīts, ka IFN-γ nobriedušas DC2.4 šūnas efektīvi aktivizē CD8+ citotoksiskās T šūnas gan in vitro, gan in vivo, pastiprinot pretvēža imunitāti. Piemēram, ir pierādīts, ka ar IFN-γ apstrādātas, ar antigēnu stimulētas DC2.4 šūnas izraisa spēcīgu CD8+ T šūnu reakciju un nodrošina aizsargājošu pretvēža iedarbību peļu modeļos. Tas uzsver šūnu līnijas lietderību vēža imūnterapijas pētījumos un vakcīnu izstrādē.

Turklāt DC2.4 šūnas ir izmantotas saimnieka un patogēna mijiedarbības izpētei, jo to atbildes reakcija uz dažādiem imūniem izaicinājumiem var imitēt iedzimtās imūnsistēmas aktivācijas aspektus. DC2.4 šūnu eksosomālo miRNS profilu analīze, jo īpaši inficējoties ar tādiem patogēniem kā Toxoplasma gondii, ir ļāvusi gūt ieskatu molekulārajos mehānismos, kas ir dendrītšūnu signalizācijas un imūnās komunikācijas pamatā. Eksosomālo miRNS diferenciālā ekspresija, reaģējot uz infekciju, liecina par potenciālo lomu saimnieka imunitātes modulēšanā un uzsver DC2.4 lietderību eksosomu un RNS imūnsistēmas pētījumos.

Audums
Kaulu smadzenes
Sinonīmi
  • DC 2.4

02Klasifikācija

Organisms
Pele
Sekss
Nav norādīts
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
ĢMO statuss
GMO-S1
Sīkāka informācija par ĢMO statusu
GMO-S1: This murine dendritic cell line (DC2.4) contains retroviral constructs encoding murine GM-CSF, v-myc and v-raf introduced by transduction, supporting transformation and growth. The inserts are stably present in the dendritic cell-derived line. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Šūnu tips
Dendrītšūnas

04Identifikatori

Atsauce
DC2.4 (Cytion kataloga numurs 305515)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
10090
Cellosaurus
CVCL_J409

05Pazīmes un uzņēmība

Vīrusi
Transformants: Rekombinantais retrovīruss J2

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabils glutamīns, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820700a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildiniet barotni ar 10 % FBS, 1 % NEAA un 10 mM HEPES
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Šķirne / pasuga
C57BL/6
Donora vecums
Nav norādīts