AKATA

يُعد خط خلايا AKATA، المشتق من لمفومة بوركيت، نموذجاً مستخدماً على نطاق واسع لدراسة كمون فيروس إبشتاين-بار (EBV) وإعادة تنشيطه. إن فيروس إبشتاين-بار هو فيروس هربس منتشر في كل مكان ومرتبط بمجموعة من أنواع السرطان، بما في ذلك لمفومة بوركيت، وعادةً ما ينشئ عدوى كامنة داخل الخلايا البائية. في خلايا AKATA، يتم الاحتفاظ بفيروس EBV في حالة عرضية مع برنامج كمون من النوع الأول، مع التعبير عن مجموعة محدودة من الجينات الفيروسية مثل EBNA-1، والحمض النووي الريبي EBER RNA، والنصوص اليمنى لـ BamHI-A (BARTs). ويسمح هذا التعبير الجيني المحدود للفيروس بالاستمرار في المضيف دون بدء دورة تحللية كاملة. ومع ذلك، يمكن تحفيز خلايا AKATA للدخول في المرحلة اللايتية، حيث يتكاثر الفيروس بنشاط وينتج ذرية. عادةً ما يتم تحفيز إعادة التنشيط هذه من خلال الغلوبولين المناعي السطحي المتشابك، مما يجعل خلايا AKATA أداة ممتازة لدراسة ديناميكيات إعادة تنشيط فيروس إبفيروس EBV وتنظيم الجينات الفيروسية.

كما درست الأبحاث التي تستخدم خط خلايا AKATA تأثير عوامل العلاج الكيميائي على إعادة تنشيط فيروس إبشتاين-إيبيف. على سبيل المثال، ثبت أن أدوية مثل إيتوبوسيد ودوكسوروبيسين تؤثر على الكمون الفيروسي. يحفّز الإيتوبوسيد موت الخلايا المبرمج في خلايا AKATA لكنه يعيد تنشيط فيروس إبشتاين-إيبيف بفعالية أقل من دوكسوروبيسين، الذي يعزز مستويات أعلى من التعبير الجيني الغائي وإنتاج السلالة الفيروسية. بالإضافة إلى ذلك، استكشفت الدراسات التي تنطوي على تقنيات تحرير الجينات، مثل CRISPR/Cas9، دور المنظّمات اللاجينية في خلايا AKATA. على سبيل المثال، تؤدي الضربة القاضية لميثيل الميثيل الهستوني EZH2 في خلايا AKATA إلى تعطيل الحفاظ على الكمون عن طريق تقليل المثيلة الثلاثية للهيستون H3K27، مما يؤدي إلى زيادة التعبير عن كل من جينات فيروس إبليس الكامنة والكامنة على حد سواء، بالإضافة إلى تعزيز التكاثر الفيروسي وتكاثر الخلايا.

تُظهر خلايا AKATA أيضًا خصائص ظاهرية متميزة بناءً على وجود فيروس EBV، مثل زيادة الحساسية للعوامل المحفزة لموت الخلايا المبرمج والاختلافات في التعبير الجيني المتعلق بمسارات موت الخلايا المبرمج. تجعل هذه الاختلافات من خلايا AKATA الإيجابية لفيروس EBV نموذجًا قويًا لتشريح تأثير فيروس EBV على بقاء الخلية المضيفة والتعبير الجيني ودورة حياة الفيروس، خاصة في سياق تطور السرطان والتدخلات العلاجية المحتملة التي تستهدف الأورام الخبيثة المرتبطة بفيروس EBV.

37 درجة مئوية، و5% من _ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

في Cytion، نلتزم في Cytion بجودة منتجاتنا وحيويتها. نحن نضمن أن تكون خلايانا قابلة للحياة في بداية الاستزراع لمدة 60 يومًا بعد الشحن من منشآتنا. نؤكد أن جميع المواد مطابقة للمواصفات الموضحة في شهادة التحليل و/أو ورقة المنتج

للحصول على التفاصيل الكاملة، يُرجى الرجوع إلى <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">بيان الضمان