AKATA

Burkittin lymfoomasta peräisin oleva AKATA-solulinja on laajalti käytetty malli Epstein-Barr-viruksen (EBV) latenssin ja reaktivoitumisen tutkimiseen. EBV on ubiikki herpesvirus, joka liittyy useisiin syöpiin, kuten Burkittin lymfoomaan, ja se muodostaa tyypillisesti latentin infektion B-soluihin. AKATA-soluissa EBV säilyy episomaalisessa tilassa tyypin I latenssiohjelmalla, joka ilmentää rajoitettua joukkoa viruksen geenejä, kuten EBNA-1:tä, EBER RNA:ta ja BamHI-A:n oikealle kääntyviä transkriptejä (BART). Tämän rajoitetun geeniekspression ansiosta virus voi säilyä isännässä käynnistämättä täyttä lyytistä sykliä. AKATA-solut voidaan kuitenkin laukaista siirtymään lyttiseen vaiheeseen, jossa virus lisääntyy aktiivisesti ja tuottaa jälkeläisiä. Tämä uudelleenaktivointi käynnistetään yleisesti ristiinkytkentäisten pintaimmunoglobuliinien avulla, mikä tekee AKATA-soluista erinomaisen välineen EBV:n uudelleenaktivointidynamiikan ja viruksen geenien säätelyn tutkimiseen.

AKATA-solulinjaa hyödyntävässä tutkimuksessa on myös tutkittu kemoterapeuttisten aineiden vaikutusta EBV:n reaktivoitumiseen. Esimerkiksi etoposidin ja doksorubisiinin kaltaisten lääkkeiden on osoitettu vaikuttavan viruksen latenssiin. Etoposidi indusoi AKATA-soluissa apoptoosia, mutta se aktivoi EBV:n uudelleen vähemmän tehokkaasti kuin doksorubisiini, joka edistää lytisen geenin korkeampaa ilmentymistä ja viruksen jälkeläisten tuotantoa. Lisäksi tutkimuksissa, joissa on käytetty geeninmuokkaustekniikoita, kuten CRISPR/Cas9:ää, on tutkittu epigeneettisten säätelijöiden roolia AKATA-soluissa. Esimerkiksi histonimetyylitransferaasi EZH2:n tyrmääminen AKATA-soluissa häiritsee latenssin ylläpitoa vähentämällä histoni H3K27:n trimetylaatiota, mikä johtaa sekä latenttien että lytisten EBV-geenien lisääntyneeseen ilmentymiseen sekä viruksen lisääntyneeseen replikaatioon ja solujen lisääntymiseen.

AKATA-soluilla on myös EBV:n läsnäoloon perustuvia erityyppisiä fenotyyppisiä ominaisuuksia, kuten lisääntynyt herkkyys apoptoosia indusoiville aineille ja vaihtelua apoptoosireitteihin liittyvässä geeniekspressiossa. Nämä erot tekevät EBV-positiivisista AKATA-soluista tehokkaan mallin, jonka avulla voidaan tutkia EBV:n vaikutusta isäntäsolujen eloonjäämiseen, geeniekspressioon ja viruksen elinkaareen, erityisesti syövän kehittymisen ja mahdollisten EBV:hen liittyviin pahanlaatuisiin sairauksiin kohdistuvien terapeuttisten toimenpiteiden yhteydessä.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa