AKATA

La linea cellulare AKATA, derivata dal linfoma di Burkitt, è un modello ampiamente utilizzato per studiare la latenza e la riattivazione del virus di Epstein-Barr (EBV). L'EBV è un herpesvirus ubiquitario legato a una serie di tumori, tra cui il linfoma di Burkitt, e di solito stabilisce un'infezione latente all'interno delle cellule B. Nelle cellule AKATA, l'EBV è mantenuto in uno stato episomale con un programma di latenza di tipo I, che esprime un insieme limitato di geni virali come EBNA-1, RNA EBER e BamHI-A rightward transcripts (BART). Questa espressione genica limitata consente al virus di persistere nell'ospite senza avviare un ciclo litico completo. Tuttavia, le cellule AKATA possono essere riattivate per entrare nella fase litica, dove il virus si replica attivamente e produce progenie. Questa riattivazione è comunemente indotta attraverso il cross-linking delle immunoglobuline di superficie, il che rende le cellule AKATA uno strumento eccellente per studiare le dinamiche di riattivazione dell'EBV e la regolazione dei geni virali.

La ricerca che utilizza la linea cellulare AKATA ha anche esaminato l'impatto degli agenti chemioterapici sulla riattivazione dell'EBV. Ad esempio, è stato dimostrato che farmaci come l'etoposide e la doxorubicina influenzano la latenza virale. L'etoposide induce l'apoptosi nelle cellule AKATA ma riattiva l'EBV in modo meno efficace rispetto alla doxorubicina, che promuove livelli più elevati di espressione genica litica e di produzione di progenie virale. Inoltre, studi che hanno coinvolto tecniche di editing genico, come CRISPR/Cas9, hanno esplorato il ruolo dei regolatori epigenetici nelle cellule AKATA. Ad esempio, il knockout dell'istone metiltransferasi EZH2 nelle cellule AKATA interrompe il mantenimento della latenza riducendo la trimetilazione dell'istone H3K27, con conseguente aumento dell'espressione dei geni EBV latenti e litici, nonché una maggiore replicazione virale e proliferazione cellulare.

Le cellule AKATA mostrano anche caratteristiche fenotipiche distinte in base alla presenza di EBV, come una maggiore sensibilità agli agenti che inducono l'apoptosi e variazioni nell'espressione dei geni correlati alle vie apoptotiche. Queste differenze rendono le cellule AKATA EBV-positive un modello potente per analizzare l'influenza dell'EBV sulla sopravvivenza delle cellule ospiti, l'espressione genica e il ciclo di vita del virus, in particolare nel contesto dello sviluppo del cancro e di potenziali interventi terapeutici mirati alle neoplasie associate all'EBV.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia