Премини към съдържанието
Тъкан
Простата
Синоними
RWPE1

Документи

RWPE-1

Cell line · Номер на продукта 305217

€650.00без ДДС и доставка

Персонализиране / Препоръки

На склад
Лот
Препоръчани (най-новата партида)
  • CoA
1

01Обща информация

Описание

Клетъчната линия RWPE-1, получена от епител на простатата на 54-годишен мъж от бялата раса без данни за рак на простатата, е ценен ресурс в биомедицинските изследвания, особено за проучвания на биологията и рака на простатата. Тези епителни клетки, характеризиращи се със свойствата си за растеж на прилепване и типична епителна морфология, са имортализирани с помощта на репликационнодефицитен ретровирус, който носи гена E7 от човешки папиломавирус 18 (HPV-18), който инактивира протеина ретинобластома и подпомага клетъчната имортализация.

Клетките RWPE-1, произхождащи от нормална човешка простата, се използват в изследванията на рака на простатата, въпреки че тяхната експресия на андрогенни рецептори е сравнително скромна, особено в сравнение с туморогенните клетъчни линии, получени от рак на простатата. Епителната клетъчна линия RWPE-1 експресира цитокератини 8 и 18, които потвърждават епителната ѝ линия. Въпреки че клетките RWPE-1 експресират туморни супресори като p53 и pRB, което отразява тяхната нетуморогенна природа, експресията на специфични за простатата маркери като Kallikrein 3 (KLK3) или PSA обикновено е ниска или липсва при стандартни условия на култивиране.

В 3D култури, като тези, образувани в Matrigel, човешките клетки RWPE-1 могат да се организират в ацинарни структури, напомнящи нормалната архитектура на простатата. Когато става въпрос за секреция на PSA (простатноспецифичен антиген) в отговор на андрогенна стимулация, клетките RWPE-1 показват по-слабо изразена реакция в сравнение с клетъчните линии на рак на простатата. Следователно, докато клетките RWPE-1 предлагат ценен модел за разбиране на основните свойства на нормалните епителни клетки на простатата.

Нетуморогенният характер на RWPE-1 служи като модел за изучаване на прехода към туморогенна трансформация и динамиката на раковите клетки, включително метастатичните клетки на рака на простатата и карциногенезата на простатата. Включването на фактори като EGF и растежен хормон в условията на култивиране може да допринесе за по-нататъшно изясняване на пътищата, свързани с хиперплазията на простатата и прогресията към рак на простатата. В обобщение, клетките RWPE-1 улесняват цялостното разбиране на рака на простатата, от инициирането му в простатни клетъчни линии до проявата му при пациенти с рак на простатата.

Тъкан
Простата
Синоними
  • RWPE1

02Класификация

Организъм
Човек
Секс
Мъж
Свойства, свързани с растежа
Привърженик
Ниво на биологична безопасност
1

03Характеристики

Морфология
Епителиален
Тип клетка
Епителна клетка на простатата
Кариотип
Клетките RWPE-1 имат диплоидна хромозомна плоидност и показват хромозомни вариации като 45, X,-Y и 51, XY.

04Идентификатори

Източник
RWPE-1 (каталожен номер 305217 на Cytion)
Данъчен идентификационен номер в NCBI
9606
Целозавър
CVCL_3791

05Обработка и отглеждане

Хранителна среда
K-SFM (Ние не доставяме този продукт; моля, помислете за други доставчици. Моля, уведомете ни, ако се нуждаете от допълнително съдействие)
Атмосфера за инкубация

37°C, 5%CO2, овлажнена атмосфера.

Добавки
Допълнете средата с 0,05 mg/ml BPE, 5 ng/ml EGF. Средата не трябва да се филтрира изцяло. Добавете BPE и EGF в 10 ml и след стерилно филтриране включете тази смес в средата.
Реагент за дисоциация
Accutase
Пресаждане
Отстранете старата среда от адхезивните клетки и ги промийте с PBS, която не съдържа калций и магнезий. За колби Т25 използвайте 3-5 ml PBS, а за колби Т75 - 5-10 ml. След това покрийте клетките изцяло с Accutase, като използвате 1-2 ml за колби Т25 и 2,5 ml за колби Т75. Оставете клетките да се инкубират на стайна температура за 8-10 минути, за да се отделят. След инкубацията внимателно разбъркайте клетките с 10 ml среда, за да ги ресуспендирате, след което центрофугирайте при 300xg за 3 минути. Изхвърлете супернатантата, ресуспендирайте клетките в прясна среда и ги прехвърлете в нови колби, които вече съдържат прясна среда.
Размразяване и култивиране
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Контрол на качеството и криоконсервация

Стерилност

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

Среда за замразяване
Като среда за криоконсервация използваме пълна среда за растеж (включително FBS) + 10% DMSO за адекватна жизнеспособност след размразяване или CM-1 (каталожен номер 800100 на Cytion), която включва оптимизирани осмопротектори и метаболитни стабилизатори за подобряване на възстановяването и намаляване на криоиндуцирания стрес.
Условия за съхранение

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Условия за доставка

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

07Дарител

Възраст на донора
54 години
Етническа принадлежност
Кавказки