Přejít na obsah
Tkáň
Prostata
Synonyma
RWPE1

Dokumenty

RWPE-1

Cell line · Číslo výrobku 305217

€650.00bez DPH a poštovného

Přizpůsobení / Doporučení

Skladem
Lot
Doporučeno (nejčerstvější šarže)
  • CoA
1

01Obecné informace

Popis

Buněčná linie RWPE-1, odvozená z epitelu prostaty 54letého muže kavkazské rasy bez známek rakoviny prostaty, je cenným zdrojem pro biomedicínský výzkum, zejména pro studie biologie a rakoviny prostaty. Tyto epitelové buňky, které se vyznačují adherenčními růstovými vlastnostmi a typickou epitelovou morfologií, byly imortalizovány pomocí retroviru s deficitem replikace, který nese gen E7 z lidského papilomaviru 18 (HPV-18), jenž inaktivuje retinoblastomový protein a podporuje buněčnou imortalizaci.

Buňky RWPE-1, pocházející z normální lidské prostaty, se využívají ve výzkumu rakoviny prostaty, ačkoli jejich exprese androgenních receptorů je relativně nízká, zejména ve srovnání s nádorovými buněčnými liniemi odvozenými od rakoviny prostaty. Epiteliální buněčná linie RWPE-1 exprimuje cytokeratiny 8 a 18, které potvrzují její epiteliální linii. Zatímco buňky RWPE-1 exprimují nádorové supresory, jako jsou p53 a pRB, což odráží jejich nenádorovou povahu, exprese prostatických specifických markerů, jako je kallikrein 3 (KLK3) nebo PSA, je za standardních kultivačních podmínek obecně nízká nebo chybí.

Ve 3D kulturách, jako jsou ty vytvořené v Matrigelu, se lidské buňky RWPE-1 mohou uspořádat do acinárních struktur připomínajících normální architekturu prostaty. Pokud jde o sekreci PSA (prostatického specifického antigenu) v reakci na stimulaci androgeny, buňky RWPE-1 vykazují méně výraznou reakci ve srovnání s buněčnými liniemi karcinomu prostaty. Zatímco tedy buňky RWPE-1 nabízejí cenný model pro pochopení základních vlastností normálních epiteliálních buněk prostaty.

Netumorigenní povaha buněk RWPE-1 slouží jako model pro studium přechodu k tumorigenní transformaci a dynamiky nádorových buněk, včetně metastatických buněk karcinomu prostaty a karcinogeneze prostaty. Zahrnutí faktorů, jako je EGF a růstový hormon, do kultivačních podmínek může dále objasnit cesty, které se podílejí na hyperplazii prostaty a progresi směrem k rakovině prostaty. Souhrnně lze říci, že buňky RWPE-1 usnadňují komplexní pochopení rakoviny prostaty, od jejího vzniku v buněčných liniích prostaty až po její projevy u pacientů s rakovinou prostaty.

Tkáň
Prostata
Synonyma
  • RWPE1

02Klasifikace

Organismus
Člověk
Sex
Muž
Růstové vlastnosti
Přívrženec
Úroveň biologické bezpečnosti
1

03Charakteristika

Morfologie
Epitelové
Typ buňky
Epitelová buňka prostaty
Karyotyp
Buňky RWPE-1 mají diploidní chromozomální ploidii a vykazují chromozomální variace, například 45, X,-Y a 51, XY.

04Identifikátory

Citace
RWPE-1 (katalogové číslo Cytion 305217)
Daňové identifikační číslo NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_3791

05Manipulace a chov

Pěstovací médium
K-SFM (Tento produkt nedodáváme; zvažte prosím jiné dodavatele. Pokud potřebujete další pomoc, dejte nám prosím vědět)
Inkubační atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplňky stravy
Doplňte médium o 0,05 mg/ml BPE, 5 ng/ml EGF. Médium by nemělo být zcela filtrováno. Přidejte BPE a EGF do 10 ml a po sterilní filtraci tuto směs vmíchejte do média.
Disociační činidlo
Accutase
Subkultivace
Odstraňte staré médium z adherovaných buněk a promyjte je PBS bez vápníku a hořčíku. Pro baňky T25 použijte 3-5 ml PBS a pro baňky T75 5-10 ml. Poté buňky zcela zakryjte přípravkem Accutase, přičemž použijte 1-2 ml pro baňky T25 a 2,5 ml pro baňky T75. Nechte buňky inkubovat při pokojové teplotě po dobu 8-10 minut, aby se oddělily. Po inkubaci jemně promíchejte buňky s 10 ml média, aby byly znovu suspendovány, a poté je odstřeďte při 300xg po dobu 3 minut. Supernatant vyhoďte, buňky znovu rozpusťte v čerstvém médiu a přeneste je do nových baněk, které již obsahují čerstvé médium.
Rozmrazování a kultivace
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kontrola kvality a kryokonzervace

Sterilita

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Mrazicí médium
Jako kryokonzervační médium používáme kompletní růstové médium (včetně FBS) + 10 % DMSO pro zajištění dostatečné životaschopnosti po rozmrazení nebo CM-1 (katalogové číslo 800100 společnosti Cytion), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu způsobeného kryo.
Podmínky skladování

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Dopravní podmínky

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

07Dárce

Věk dárce
54 let
Etnická příslušnost
Kavkazský