Pāriet uz saturu
Audums
Prostatas
Sinonīmi
RWPE1

Dokumenti

RWPE-1

Cell line · Preces numurs 305217

€650.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

RWPE-1 šūnu līnija, kas iegūta no 54 gadus veca baltādaina vīrieša prostatas epitēlija, kuram nav prostatas vēža pazīmju, ir vērtīgs resurss biomedicīniskajos pētījumos, īpaši pētījumos par prostatas bioloģiju un vēzi. Šīs epitēlija šūnas, kurām raksturīgas adherences augšanas īpašības un tipiska epitēlija morfoloģija, tika imortalizētas, izmantojot replikācijas deficīta retrovīrusu, kas nes E7 gēnu no cilvēka papilomas vīrusa 18 (HPV-18), kurš inaktivē retinoblastomas proteīnu un veicina šūnu imortalizāciju.

RWPE-1 šūnas, kas iegūtas no normālas cilvēka prostatas, tiek izmantotas prostatas vēža pētījumos, lai gan to androgēnu receptoru ekspresija ir salīdzinoši neliela, īpaši salīdzinājumā ar prostatas vēža tumorigēnām šūnu līnijām. RWPE-1 epitēlija šūnu līnija RWPE-1 ekspresē citokeratīnus 8 un 18, kas apstiprina to epitēlija līniju. Lai gan RWPE-1 šūnas ekspresē tādus audzēja supresorus kā p53 un pRB, kas liecina par to, ka tās nav tumorogēnas, prostatas specifisko marķieru, piemēram, kallikreīna 3 (KLK3) vai PSA, ekspresija standarta kultūras apstākļos parasti ir zema vai tās nav vispār.

3D kultūrās, piemēram, veidotās Matrigel, cilvēka RWPE-1 šūnas var organizēties acināru struktūrās, kas atgādina normālu prostatas arhitektūru. Attiecībā uz PSA (prostatas specifiskā antigēna) sekrēciju, reaģējot uz androgēnu stimulāciju, RWPE-1 šūnas uzrāda mazāk izteiktu reakciju salīdzinājumā ar prostatas vēža šūnu līnijām. Tāpēc RWPE-1 šūnas ir vērtīgs modelis, lai izprastu normālu prostatas epitēlija šūnu pamatīpašības.

Tas, ka RWPE-1 šūnas nav tumorogēnas, kalpo kā modelis, lai pētītu pāreju uz tumorogēnu transformāciju un vēža šūnu dinamiku, tostarp metastātisku prostatas vēža šūnu un prostatas kanceroģenēzi. Tādu faktoru kā EGF un augšanas hormona iekļaušana kultūras apstākļos var vēl vairāk noskaidrot prostatas hiperplāzijā un prostatas vēža progresijā iesaistītos ceļus. Kopumā RWPE-1 šūnas palīdz gūt vispusīgu izpratni par prostatas vēzi, sākot no tā rašanās prostatas šūnu līnijās līdz tā izpausmēm prostatas vēža pacientiem.

Audums
Prostatas
Sinonīmi
  • RWPE1

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Vīrietis
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlija
Šūnu tips
Prostatas epitēlija šūna
Kariotips
RWPE-1 šūnām ir diploīda hromosomu ploidija, un tām ir hromosomu variācijas, piemēram, 45, X,-Y un 51, XY.

04Identifikatori

Atsauce
RWPE-1 (Cytion kataloga numurs 305217)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_3791

05Apstrāde un audzēšana

Barotne
K-SFM (Mēs nepiegādājam šo produktu; lūdzu, apsveriet citus piegādātājus. Lūdzu, informējiet mūs, ja jums nepieciešama papildu palīdzība)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildiniet barotni ar 0,05 mg/ml BPE, 5 ng/ml EGF. Barotni nedrīkst pilnībā filtrēt. Pievieno BPE un EGF 10 ml un pēc sterilas filtrēšanas šo maisījumu iekļauj barotnē.
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

07Ziedotājs

Donora vecums
54 gadi
Etniskā piederība
Kaukāzietis