Mine otse sisu juurde
HK-ZFN-AURKB-mEGFP/ZFN-INCENP-mCherry rakud
Kude
Endocervix
Haigus
Adenokartsinoom
Metastaaside asukoht
Esmane kasvaja asukoht (emaka kaela sisemine osa)
Sünonüümid
HK-ZFN-AURKB-mEGFP, ZFN-INCENP-mCherry

Dokumendid

HK-ZFN-AURKB-mEGFP/ZFN-INCENP-mCherry rakud

Cell line · Toote number 300270

HeLa Kyoto rakkudest saadud rakuliin HK-ZFN-AURKB-mEGFP/ZFN-INCENP-mCherry on rakubioloogia uuringutes kasutatav spetsialiseeritud mudel. Seda on ...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
1

01Üldine teave

Kirjeldus

HK-ZFN-AURKB-mEGFP/ZFN-INCENP-mCherry rakuliin, mis on saadud HeLa Kyoto rakkudest, on rakubioloogilistes uuringutes kasutatav erimudel. See on geneetiliselt muundatud, et ekspresseerida Aurora B kinaasi (AURKB), mis on märgistatud monomeerse tugevdatud rohelise fluorestseeruva valguga (mEGFP), ja mCherryga märgistatud sisemise tsentromeeri valgu (INCENP). Need modifikatsioonid võimaldavad teadlastel jälgida nende valkude dünaamikat ja vastastikmõju raku jagunemise ajal. Aurora B kinaas on oluline kromosoomide segregatsiooniks ja tsütokineesiks, samas kui INCENP on kromosoomi reisijakompleksi (CPC) kriitiline komponent, mis koordineerib mitoosi kulgu.

Selline kahekordne fluorestseeriv märgistamine annab võimsa vahendi elusraku kujutamiseks, mis võimaldab üksikasjalikult uurida valkude jaotumist rakutsükli ajal. HK-ZFN-AURKB-mEGFP/ZFN-INCENP-mCherry rakuliin on väärtuslik mitootilise regulatsiooni, kromosomaalse stabiilsuse ja mitootilise kontrollpunkti uurimiseks. Geneetilisteks modifikatsioonideks kasutatavate tsinksõrmenukleaaside (ZFN) täpsus tagab selle mudeli täpsuse, mistõttu on see ideaalne vähibioloogia ja terapeutiliste ravimite väljatöötamise kõrge täpsusega uuringuteks.

Kude
Endocervix
Haigus
Adenokartsinoom
Metastaaside asukoht
Esmane kasvaja asukoht (emaka kaela sisemine osa)
Rakendused
kromosoomide kaasreisijate kompleksi (CPC) bioloogia; Aurora B-kinaasi ja INCENP dünaamika; elusrakkude mitoosi pildistamine; kahevärviline fluorestsentsjälgimine; kromosoomide segregeerumine; tsütokinees; mitootiline kontrollpunkt; ZFN-põhise genoomi redigeerimise valideerimine
Sünonüümid
  • HK-ZFN-AURKB-mEGFP
  • ZFN-INCENP-mCherry

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Naine
Kasvuvõime
Järgija
GMO-staatus
GMO-S1
GMO-staatuse üksikasjad
GMO-S1: This HeLa Kyoto dual-color line contains ZFN-engineered AURKB-mEGFP and INCENP-mCherry constructs for chromosome passenger complex studies. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed rakud, millel on mosaiikne kivikuju
Rakutüüp
Epiteelirakud

04Tunnused

Viide
HK-ZFN-AURKB-mEGFP/ZFN-INCENP-mCherry (Cytioni katalooginumber 300270)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_VL14
Hoiustaja
Ellenbergi labor (EMBL)

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Tooted
EGFP (tõhustatud roheline fluorestseeruv valk)

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM, w: 4,5 g/L glükoosi, w: 4 mM L-glutamiini, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM naatriumpüruvaati (Cytioni artikli number 820300a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Doonori vanus
30 aastat
Etniline kuuluvus
Afroameeriklane