MDA-MB-231-GFP

MDA-MB-231-GFP yra plačiai naudojamos žmogaus krūties vėžio ląstelių linijos MDA-MB-231 fluorescenciniu žymekliu pažymėta atmaina, genetiškai modifikuota taip, kad per lentivirusinę transdukciją ekspresuotų žalią fluorescuojantį baltymą (GFP). Ši modifikacija leidžia realiuoju laiku stebėti ir kiekybiškai įvertinti naviko ląstelių dinamiką tiek in vitro, tiek in vivo, o tai palengvina išsamią naviko ir stromos sąveikos, ląstelių proliferacijos bei metastazavimo elgsenos analizę. Pirminė MDA-MB-231 linija kilusi iš paciento, sergančio trigubai neigiamu krūties vėžiu (TNBC), pleuros išsiliejimo skysčio ir pasižymi agresyviu, invaziniu elgesiu bei mezenchiminiu fenotipu, todėl ji yra pagrindinis modelis TNBC patofiziologijos ir atsparumo gydymui tyrimams.

Atliekant bendros kultūros eksperimentus su žmogaus mezenchiminėmis kamieninėmis/stromos ląstelėmis (MSC), MDA-MB-231-GFP ląstelės parodė žymiai sustiprėjusią proliferaciją ir naviką skatinančią elgseną. Tyrimai parodė, kad šiam efektui lemiamą reikšmę turi tiesioginis kontaktas su MSC, o ne vien tik tirpūs veiksniai. Konkrečiai, bendra kultūra su MSC po keturių dienų lėmė 39,5 % didesnę MDA-MB-231-GFP ląstelių proliferaciją, palyginti su monokultūra, ir paskatino CD90 ekspresiją tam tikroje krūties vėžio ląstelių grupėje – tai žymuo, kuris įprastomis sąlygomis nėra ekspresuojamas. Ši MSC sukeliama CD90 ekspresija reikalavo tiesioginės ląstelių tarpusavio sąveikos ir buvo iš dalies slopinama blokuojant tarpląstelines jungtis arba „Notch“ signalizavimą, o tai rodo, kad procese dalyvauja specifiniai tarpląsteliniai komunikacijos keliai.

In vivo, kartu sušvirkštus MDA-MB-231-GFP ląsteles ir MSC į imunodeficitus NOD/scid peles, naviko tūris padidėjo maždaug dešimt kartų, o metastazavimo potencialas sustiprėjo, palyginti su atveju, kai buvo sušvirkštos tik vėžio ląstelės. Šie navikai pasižymėjo padidėjusiu kraujagyslių tankumu ir didesniu gyvybingumu bei išlaikė nedidelę CD90-teigiamą populiaciją, o tai patvirtina in vitro gautus rezultatus. Apibendrinant, šie tyrimai leidžia MDA-MB-231-GFP laikyti patikimu modeliu, skirtu tirti naviko ir stromos sąveikas, MSC sukeltą fenotipinį plastiškumą bei naviko progresavimo mechanizmus trigubai neigiamo krūties vėžio atveju.

Genetinis modifikavimas: stabiliai modifikuota replikacijos nesugebančios lentivirusinės transdukcijos būdu, kad ekspresuotų žalią fluorescuojančio baltymo reporterį „ZsGreen1“; išlaikoma kaip polikloninė populiacija, atrinkta puromicino atrankos būdu (1–5 µg/mL). S1/BSL-1 saugumo lygis.

37 °C, 5 %_CO2, drėkintoje atmosferoje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

" Cytion" garantuoja savo produktų kokybę ir gyvybingumą. Garantuojame, kad mūsų ląstelės bus gyvybingos kultūrų auginimo pradžioje 60 dienų po išsiuntimo iš mūsų gamyklos. Užtikriname, kad visos medžiagos atitinka analizės sertifikate ir (arba) gaminio lape aprašytas specifikacijas

Išsamią informaciją rasite mūsų <a href=""/Kas mes esame/garantijos/" hreflang=""x-default"">Garantijos pareiškime