MDA-MB-231-GFP

MDA-MB-231-GFP to znakowana fluorescencyjnie odmiana powszechnie stosowanej ludzkiej linii komórkowej raka piersi MDA-MB-231, zmodyfikowana genetycznie w celu ekspresji zielonego białka fluorescencyjnego (GFP) poprzez transdukcję lentiwirusową. Modyfikacja ta umożliwia wizualizację i kwantyfikację dynamiki komórek nowotworowych w czasie rzeczywistym zarówno in vitro, jak i in vivo, ułatwiając szczegółową analizę interakcji między nowotworem a zrębem, proliferacji komórkowej oraz zachowań przerzutowych. Pierwotna linia MDA-MB-231 pochodzi z wysięku opłucnowego pacjentki z potrójnie ujemnym rakiem piersi (TNBC) i wykazuje agresywne, inwazyjne zachowanie o fenotypie mezenchymalnym, co czyni ją podstawowym modelem do badania patofizjologii TNBC i oporności na leczenie.

W eksperymentach z hodowlą mieszaną z ludzkimi mezenchymalnymi komórkami macierzystymi/stromalnymi (MSC) komórki MDA-MB-231-GFP wykazały znacznie zwiększoną proliferację i zachowania sprzyjające rozwojowi nowotworu. Badania wykazały, że dla uzyskania tego efektu kluczowe znaczenie ma bezpośredni kontakt z MSC, a nie same czynniki rozpuszczalne. W szczególności współhodowla z komórkami MSC doprowadziła po czterech dniach do wzrostu proliferacji komórek MDA-MB-231-GFP o 39,5% w porównaniu z hodowlą pojedynczą oraz indukowała ekspresję CD90 w podgrupie komórek raka piersi – markera, który nie ulega ekspresji w standardowych warunkach. Ta indukowana przez MSC ekspresja CD90 wymagała bezpośredniej interakcji międzykomórkowej i była częściowo hamowana przez blokowanie połączeń szczelinowych lub sygnalizacji Notch, co wskazuje na udział określonych szlaków komunikacji międzykomórkowej.

In vivo, współwstrzyknięcie komórek MDA-MB-231-GFP wraz z MSC do myszy NOD/scid z niedoborem odporności spowodowało około dziesięciokrotny wzrost objętości guza i zwiększony potencjał przerzutowy w porównaniu z wstrzyknięciem samych komórek nowotworowych. Nowotwory te wykazywały zwiększone unaczynienie i wyższą żywotność oraz zachowały mniejszościową populację komórek CD90-dodatnich, co potwierdza wyniki badań in vitro. W sumie badania te wskazują, że linia MDA-MB-231-GFP stanowi solidny model do badania interakcji między guzem a zrębem, plastyczności fenotypowej indukowanej przez komórki MSC oraz mechanizmów progresji nowotworu w potrójnie ujemnym raku piersi.

Modyfikacja genetyczna: Stabilnie zmodyfikowane poprzez transdukcję lentiwirusową o niezdolności do replikacji w celu ekspresji reporterowego białka fluorescencyjnego ZsGreen1; utrzymywane jako populacja poliklonalna pod selekcją puromycyny (1–5 µg/mL). Poziom bezpieczeństwa S1/BSL-1.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym