GIST-T1

Linia komórkowa GIST-T1 stanowi uznany model ludzkiego guza stromalnego przewodu pokarmowego (GIST), wyhodowany z przerzutu do opłucnej, będącego następstwem pierwotnego GIST żołądka u dorosłej Japonki. Analizy immunohistochemiczne potwierdziły silną pozytywność dla c-KIT (CD117) i CD34, dwóch charakterystycznych markerów GIST, podczas gdy linia wykazała wynik ujemny dla desminy, S-100 i α-aktyny mięśni gładkich, co potwierdza jej pochodzenie inne niż mięśniowe i nerwowe. Badania cytogenetyczne ujawniły kariotyp hipodiploidalny ze złożonymi nieprawidłowościami chromosomowymi, w tym chromosomem pierścieniowym i kilkoma niezrównoważonymi translokacjami. Analizy porównawczej hybrydyzacji genomowej (CGH) i FISH wykazały amplifikacje wysokiego poziomu w regionach 3q26.1-27, 5p12-15.1 oraz 7q21.3-36, często kojarzonych z amplifikacją onkogenów w GIST.

GIST-T1 zawiera klinicznie istotną 57-nukleotydową delecję w ramce odczytu w eksonie 11 genu *KIT* (V570-Y578), jedną z najczęstszych mutacji u pacjentów z GIST i kluczowy cel inhibitorów kinazy tyrozynowej, takich jak imatynib. To sprawiło, że GIST-T1 stał się niezbędnym modelem do badania onkogenezy wywołanej przez KIT i odpowiedzi na leczenie. W długotrwałej hodowli komórki GIST-T1 wykazują stabilną proliferację i zachowują wrażliwość na imatynib, chyba że zostaną specjalnie wyselekcjonowane pod kątem oporności. W celach badawczych wyhodowano pochodne, oporne podlinie GIST-T1, które wykazują wtórne mutacje KIT (np. D820V lub D820Y), umożliwiając badanie mechanizmów oporności i adaptacyjnych zmian transkrypcyjnych. Te oporne modele wykazują zmiany w genach związanych z detoksykacją, regulacją cyklu komórkowego i unikaniem apoptozy.

GIST-T1 przyczynił się również do odkrycia nowych czynników onkogennych w GIST, w tym genów fuzyjnych, takich jak EXOC2-AK7, zidentyfikowanych w podlinii opornej na imatynib. Badania funkcjonalne wykazały, że te geny fuzyjne zwiększają zdolności proliferacyjne i migracyjne komórek GIST oraz uwrażliwiają je na imatynib, wskazując na nowe możliwości terapeutyczne. Obecność super-wzmacniaczy związanych z GIST i sieci czynników transkrypcyjnych (np. HAND1 w progresji przerzutowej) dodatkowo wzmacnia przydatność modelu w rozszyfrowywaniu architektury epigenetycznej i transkrypcyjnej GIST. Podsumowując, GIST-T1 zapewnia solidny, zweryfikowany genetycznie i fenotypowo system do badania biologii, odpowiedzi na leki i mechanizmów oporności guzów stromalnych przewodu pokarmowego.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym