GIST-T1

GIST-T1 hücre hattı, yetişkin bir Japon kadında primer mide GIST’sine bağlı metastatik plevral lezyondan elde edilen, iyi bilinen bir insan gastrointestinal stromal tümör (GIST) modelidir. İmmünohistokimyasal analizler, GIST'in iki belirgin belirteci olan c-KIT (CD117) ve CD34 için güçlü pozitifliği doğrularken, hat desmin, S-100 ve α-düz kas aktini için negatifti; bu da kas ve sinir kökenli olmadığını doğruladı. Sitogenetik çalışmalar, halka kromozom ve birkaç dengesiz translokasyon dahil olmak üzere karmaşık kromozomal anormalliklere sahip hipodiploid bir karyotip ortaya çıkardı. Karşılaştırmalı genomik hibridizasyon (CGH) ve FISH analizleri, GIST'te sıklıkla onkogen amplifikasyonu ile ilişkili olan 3q26.1-27, 5p12-15.1 ve 7q21.3-36 bölgelerinde yüksek düzeyde amplifikasyonlar gösterdi.

GIST-T1, *KIT* geninin (V570-Y578) 11. eksonunda klinik olarak önemli bir 57 nükleotidlik çerçeve içi delesyon barındırmaktadır; bu, GIST hastalarında en yaygın mutasyonlardan biridir ve imatinib gibi tirozin kinaz inhibitörlerinin kritik bir hedefidir. Bu durum, GIST-T1'i KIT kaynaklı onkogenez ve terapötik yanıtı incelemek için vazgeçilmez bir model haline getirmiştir. Uzun süreli kültürde, GIST-T1 hücreleri stabil proliferasyon gösterir ve direnç için özel olarak seçilmedikçe imatinibe duyarlılığını korur. Araştırma amaçlı olarak GIST-T1'in dirençli alt hatları oluşturulmuştur ve bunlar ikincil KIT mutasyonları (örn. D820V veya D820Y) sergiler, bu da direnç mekanizmaları ve adaptif transkripsiyonel değişikliklerin incelenmesini mümkün kılar. Bu dirençli modeller, detoksifikasyon, hücre döngüsü düzenlemesi ve apoptoz kaçışı ile ilgili genlerde değişiklikler gösterir.

GIST-T1 ayrıca, imatinib dirençli alt hatlarda tanımlanan EXOC2-AK7 gibi füzyon genleri de dahil olmak üzere, GIST'te yeni onkojenik sürücülerin keşfine katkıda bulunmuştur. Fonksiyonel çalışmalar, bu füzyon genlerinin GIST hücrelerinin proliferatif ve göç yeteneklerini artırdığını ve onları imatinib'e duyarlı hale getirdiğini göstermiş ve yeni terapötik yollara işaret etmiştir. GIST ile ilişkili süper güçlendiricilerin ve transkripsiyon faktörü ağlarının (örneğin, metastatik ilerlemede HAND1) varlığı, GIST'in epigenetik ve transkripsiyonel mimarisini deşifre etmede modelin yararını daha da güçlendirmektedir. Sonuç olarak, GIST-T1, gastrointestinal stromal tümörlerin biyolojisini, ilaç yanıtını ve direnç mekanizmalarını incelemek için genetik ve fenotipik olarak doğrulanmış sağlam bir sistem sunmaktadır.

37°C, %5_CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

Cytion olarak ürünlerimizin kalitesinin ve canlılığının arkasındayız. Hücrelerimizin, tesislerimizden sevkiyattan sonra 60 gün boyunca kültürün başlangıcında canlı olacağını garanti ediyoruz. Tüm malzemelerin Analiz Sertifikası ve/veya Ürün Sayfasında açıklanan özelliklere uygun olduğunu garanti ediyoruz

Tüm ayrıntılar için lütfen <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garanti Beyanımıza bakın