GIST-T1

GIST-T1-solulinja on vakiintunut ihmisen ruoansulatuskanavan stromasolukasvaimen (GIST) malli, joka on peräisin aikuisten japanilaisen naisen primaarisen mahalaukun GIST-kasvaimen aiheuttamasta metastaattisesta keuhkopussin vauriosta. Immunohistokemialliset analyysit vahvistivat voimakkaan positiivisuuden c-KIT:lle (CD117) ja CD34:lle, kahdelle GIST:n tunnusmerkille, kun taas linja oli negatiivinen desmiinille, S-100:lle ja α-sileälihasaktinille, mikä vahvisti sen ei-lihas- ja ei-hermoperäisen alkuperän. Sytogeneettiset tutkimukset paljastivat hypodiploidisen karyotyypin, jossa oli monimutkaisia kromosomipoikkeavuuksia, mukaan lukien rengaskromosomi ja useita epätasapainoisia translokaatioita. Vertaileva genomin hybridisaatio (CGH) ja FISH-analyysit osoittivat korkeatasoisia amplifikaatioita alueilla 3q26.1–27, 5p12–15.1 ja 7q21.3–36, jotka liittyvät usein onkogeenien amplifikaatioon GIST:ssä.

GIST-T1:ssä on kliinisesti merkityksellinen 57 nukleotidin in-frame-deleetio *KIT*-geenin eksonissa 11 (V570-Y578), joka on yksi yleisimmistä mutaatioista GIST-potilailla ja tyrosiinikinaasi-inhibiittorien, kuten imatinibin, kriittinen kohde. Tämä on tehnyt GIST-T1:stä olennaisen mallin KIT-välitteisen onkogeneesin ja terapeuttisen vasteen tutkimiseen. Pitkäaikaisessa viljelyssä GIST-T1-solut lisääntyvät vakaasti ja säilyttävät herkkyytensä imatinibille, ellei niitä ole nimenomaisesti valittu resistenssin suhteen. GIST-T1:stä on tuotettu tutkimustarkoituksiin johdettuja resistenttejä alalinjoja, joissa esiintyy sekundaarisia KIT-mutaatioita (esim. D820V tai D820Y), mikä mahdollistaa resistenssimekanismien ja adaptiivisten transkriptiomuutosten tutkimisen. Näissä resistentissä malleissa esiintyy muutoksia detoksifikaatioon, solusyklin säätelyyn ja apoptoosin välttämiseen liittyvissä geeneissä.

GIST-T1 on myös edistänyt uusien onkogeenisten ajurien löytämistä GIST:ssä, mukaan lukien fuusiogeenit kuten EXOC2-AK7, jotka on tunnistettu imatinib-resistenteissä alalinjoissa. Toiminnalliset tutkimukset osoittivat, että nämä fuusiogeenit tehostavat GIST-solujen proliferaatio- ja migraatiokykyä ja herkistävät niitä imatinibille, mikä viittaa uusiin hoitovaihtoehtoihin. GIST-liittyvien supertehostajien ja transkriptiotekijäverkostojen (esim. HAND1 metastaattisessa etenemisessä) läsnäolo vahvistaa entisestään mallin hyödyllisyyttä GIST:n epigeneettisen ja transkriptioarkkitehtuurin selvittämisessä. Kaiken kaikkiaan GIST-T1 tarjoaa vankan, geneettisesti ja fenotyyppisesti validoidun järjestelmän ruoansulatuskanavan stromasolujen kasvaimien biologian, lääkevasteen ja resistenssimekanismien tutkimiseen.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa