GIST-T1

La línea celular GIST-T1 es un modelo bien establecido de tumor estromal gastrointestinal (GIST) humano, derivado de una lesión pleural metastásica secundaria a un GIST gástrico primario en una mujer japonesa adulta. Los análisis inmunohistoquímicos confirmaron una fuerte positividad para c-KIT (CD117) y CD34, dos marcadores característicos del GIST, mientras que la línea dio negativo para desmina, S-100 y actina alfa del músculo liso, lo que confirma su origen no muscular y no neural. Los estudios citogenéticos revelaron un cariotipo hipodiploide con anomalías cromosómicas complejas, incluyendo un cromosoma en anillo y varias translocaciones desequilibradas. Los análisis de hibridación genómica comparativa (CGH) y FISH mostraron amplificaciones de alto nivel en las regiones 3q26.1-27, 5p12-15.1 y 7q21.3-36, a menudo asociadas con la amplificación de oncogenes en los GIST.

El GIST-T1 presenta una deleción en marco de lectura de 57 nucleótidos, clínicamente relevante, en el exón 11 del gen *KIT* (V570-Y578), una de las mutaciones más comunes en pacientes con GIST y un blanco crítico de los inhibidores de la tirosina quinasa, como el imatinib. Esto ha convertido al GIST-T1 en un modelo esencial para estudiar la oncogénesis impulsada por KIT y la respuesta terapéutica. En cultivos a largo plazo, las células GIST-T1 muestran una proliferación estable y conservan la sensibilidad al imatinib, a menos que se seleccionen específicamente para desarrollar resistencia. Se han generado sublíneas resistentes derivadas de GIST-T1 con fines de investigación, las cuales presentan mutaciones secundarias en el gen KIT (por ejemplo, D820V o D820Y), lo que permite estudiar los mecanismos de resistencia y los cambios transcripcionales adaptativos. Estos modelos resistentes muestran alteraciones en genes relacionados con la desintoxicación, la regulación del ciclo celular y la evasión de la apoptosis.

El GIST-T1 también ha contribuido al descubrimiento de nuevos factores oncogénicos en el GIST, incluidos genes de fusión como EXOC2-AK7, identificados en sublíneas resistentes al imatinib. Los estudios funcionales demostraron que estos genes de fusión aumentan las capacidades proliferativas y migratorias de las células de GIST y las sensibilizan al imatinib, lo que apunta hacia nuevas vías terapéuticas. La presencia de superpotenciadores asociados a los GIST y de redes de factores de transcripción (por ejemplo, HAND1 en la progresión metastásica) refuerza aún más la utilidad del modelo para descifrar la arquitectura epigenética y transcripcional de los GIST. En conjunto, GIST-T1 ofrece un sistema robusto, validado genética y fenotípicamente, para estudiar la biología, la respuesta a los fármacos y los mecanismos de resistencia de los tumores estromales gastrointestinales.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.