GIST-T1

GIST-T1 šūnu līnija ir labi izstrādāts cilvēka gastrointestinālā stromas audzēja (GIST) modelis, kas iegūts no metastātiska pleiras bojājuma, kas radies kā sekundārs primāram kuņģa GIST pieaugušai japāņu sievietei. Imunohistokīmiskās analīzes apstiprināja spēcīgu pozitīvu reakciju uz c-KIT (CD117) un CD34, diviem raksturīgiem GIST marķieriem, savukārt līnija bija negatīva attiecībā uz desmīnu, S-100 un α-gludās muskulatūras aktīnu, apstiprinot tās nemuskulāro un neiroloģisko izcelsmi. Citogenētiskie pētījumi atklāja hipodiploīdu kariotipu ar sarežģītām hromosomu anomālijām, tostarp gredzenveida hromosomu un vairākas nelīdzsvarotas translokācijas. Salīdzinošā genomiskā hibridizācija (CGH) un FISH analīzes parādīja augsta līmeņa amplifikācijas 3q26.1–27, 5p12–15.1 un 7q21.3–36 reģionos, kas bieži saistīti ar onkogēnu amplifikāciju GIST.

GIST-T1 satur klīniski nozīmīgu 57 nukleotīdu in-frame deleciju *KIT* gēna 11. eksonā (V570-Y578), kas ir viena no visbiežāk sastopamajām mutācijām GIST pacientiem un kritisks mērķis tirozīna kināzes inhibitoriem, piemēram, imatinibam. Tas ir padarījis GIST-T1 par būtisku modeli KIT-vadītas onkogēzes un terapeitiskās atbildes pētīšanai. Ilgtermiņa kultūrā GIST-T1 šūnas parāda stabilu proliferāciju un saglabā jutību pret imatinibu, ja vien tās nav īpaši atlasītas rezistences dēļ. Pētniecības nolūkos ir izveidotas GIST-T1 rezistentās atvasinājumu sublīnijas, kurām ir sekundāras KIT mutācijas (piemēram, D820V vai D820Y), kas ļauj pētīt rezistences mehānismus un adaptīvās transkripcijas izmaiņas. Šie rezistentie modeļi parāda izmaiņas gēnos, kas saistīti ar detoksikāciju, šūnu cikla regulāciju un apoptozes izvairīšanos.

GIST-T1 ir arī veicinājis jaunu onkogēnu faktoru atklāšanu GIST, tostarp fūzijas gēnus, piemēram, EXOC2-AK7, kas identificēti imatinibam rezistentās sublīnijās. Funkcionālie pētījumi parādīja, ka šie fūzijas gēni pastiprina GIST šūnu proliferatīvās un migrācijas spējas un padara tās jutīgākas pret imatinibu, norādot uz jaunām terapeitiskām iespējām. GIST saistīto superpastiprinātāju un transkripcijas faktoru tīklu (piemēram, HAND1 metastāžu progresēšanā) klātbūtne vēl vairāk pastiprina modeļa lietderību GIST epigenētiskās un transkripcijas arhitektūras atšifrēšanā. Kopumā GIST-T1 nodrošina stabilu, ģenētiski un fenotipiski validētu sistēmu gastrointestinālo stromas audzēju bioloģijas, reakcijas uz zālēm un rezistences mehānismu izpētei.

37°C, 5%_CO2, mitrināta atmosfēra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

Uzņēmumā Cytion mēs atbalstām savu produktu kvalitāti un dzīvotspēju. Mēs garantējam, ka mūsu šūnas būs dzīvotspējīgas kultivēšanas sākumā 60 dienas pēc nosūtīšanas no mūsu ražotnēm. Mēs nodrošinām, ka visi materiāli atbilst analīzes sertifikātā un/vai produkta lapā aprakstītajām specifikācijām

Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet mūsu <a href=""/"/Kas mēs esam/garantija/"" hreflang=""x-default"">Garantijas paziņojumu