Wilms3

La lignée cellulaire Wilms3 a été établie à partir d’une tumeur de Wilms primaire chez un enfant, caractérisée par une mutation somatique du gène WT1. Contrairement à de nombreuses autres lignées cellulaires de tumeurs de Wilms, Wilms3 porte une mutation hétérozygote avec décalage du cadre de lecture dans le gène WT1 (c.1293-1294insA, p.V432SfsX87), ce qui entraîne la production d’une protéine WT1 tronquée. Cette perte partielle de la fonction de WT1 est associée au développement de tumeurs présentant un phénotype stromal ou mésenchymateux. Cependant, la mutation du gène WT1 dans Wilms3 n’est pas homozygote, ce qui complique son étude, car elle conserve une partie de la fonction de WT1 susceptible d’influencer la biologie tumorale différemment par rapport aux lignées cellulaires présentant une perte complète de WT1.

La tumeur de Wilms3 porte également une mutation du gène CTNNB1, touchant plus précisément la thréonine 41 (p.T41A), qui joue un rôle essentiel dans la voie de signalisation Wnt. Cette mutation stabilise la β-caténine, empêchant sa dégradation et entraînant l’activation constitutive de la voie Wnt. L’activation persistante de la voie de signalisation Wnt stimule la prolifération cellulaire et contribue à la tumorigenèse dans Wilms3, ce qui en fait un modèle clé pour étudier l’impact des mutations du gène CTNNB1 dans le contexte d’un fond WT1 partiellement fonctionnel.

Sur le plan phénotypique, les cellules Wilms3 présentent une morphologie de type mésenchymateuse, exprimant la vimentine et dépourvues de cytokératine, ce qui correspond aux caractéristiques stromales observées dans la tumeur d’origine. Ces cellules présentent un potentiel de différenciation limité, avec la capacité de subir une certaine différenciation mésenchymateuse dans des conditions spécifiques. Les analyses protéomiques de Wilms3 ont révélé l’activation de plusieurs récepteurs tyrosine-kinases (RTK), notamment PDGFRβ et AXL, qui favorisent la survie et la prolifération cellulaires. De plus, des voies de signalisation en aval, telles que MAPK et PI3K/AKT, sont activées, renforçant ainsi les propriétés malignes des cellules Wilms3.

Un aspect unique de Wilms3 réside dans la fonctionnalité partielle de WT1, ce qui offre une perspective distincte sur la manière dont les mutations de WT1 contribuent à la biologie de la tumeur de Wilms lorsque la mutation n’est pas complète. L’interaction entre WT1 et la voie de signalisation Wnt dans Wilms3 offre une occasion précieuse d’étudier les rôles nuancés que ces voies jouent dans le développement tumoral. Dans l’ensemble, Wilms3 constitue un modèle important pour l’étude des mécanismes moléculaires sous-jacents à la tumeur de Wilms en présence d’une perte partielle de WT1 et d’une activation constitutive de la voie Wnt.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.