Wilms3

Клітинну лінію Wilms3 було отримано з первинної пухлини Вільмса у педіатричного пацієнта, що характеризується соматичною мутацією WT1. На відміну від багатьох інших клітинних ліній пухлини Вільмса, лінія Wilms3 має гетерозиготну мутацію зсуву рамки в гені WT1 (c.1293-1294insA, p.V432SfsX87), що призводить до вироблення усіченого білка WT1. Ця часткова втрата функції WT1 пов'язана з розвитком пухлин, які мають стромальний або мезенхімальний фенотип. Однак мутація WT1 у Wilms3 не є гомозиготною, що додає складнощів у її вивченні, оскільки вона зберігає певну функцію WT1, яка може впливати на біологію пухлини інакше, ніж клітинні лінії з повною втратою WT1.

Wilms3 також несе мутацію в гені CTNNB1, що впливає на треонін 41 (p.T41A), який відіграє важливу роль у сигнальному шляху Wnt. Ця мутація стабілізує β-катенін, запобігаючи його деградації та призводить до конститутивної активації шляху Wnt. Стійка активація сигнального шляху Wnt стимулює проліферацію клітин і сприяє пухлиноутворенню в лінії Wilms3, що робить її ключовою моделлю для вивчення впливу мутацій CTNNB1 в контексті частково функціонального фону WT1.

Фенотипічно клітини Wilms3 мають мезенхімальну морфологію, експресують віментин і не містять цитокератину, що відповідає стромальним характеристикам, які спостерігаються у вихідній пухлині. Ці клітини мають обмежений потенціал диференціювання, але здатні до мезенхімального диференціювання за певних умов. Протеомний аналіз Wilms3 виявив активацію декількох рецепторних тирозинкіназ (RTK), включаючи PDGFRβ і AXL, які підтримують виживання і проліферацію клітин. Крім того, активуються наступні сигнальні шляхи, такі як MAPK і PI3K/AKT, що посилює злоякісні властивості клітин Wilms3.

Одним з унікальних аспектів Wilms3 є часткова функціональність WT1, що дає чітке уявлення про те, як мутації WT1 впливають на біологію пухлини Вільмса, коли мутація не є повною. Взаємодія між сигналами WT1 і Wnt у Wilms3 дає цінну можливість вивчити нюанси ролі цих шляхів у розвитку пухлин. В цілому, Wilms3 слугує важливою моделлю для дослідження молекулярних механізмів, що лежать в основі пухлини Вільмса за наявності часткової втрати WT1 та конститутивної активації шляху Wnt.

37°C, 5% _CO2, волога атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Зараження мікоплазмою виключається за допомогою аналізів на основі ПЛР та люмінесцентних методів виявлення мікоплазми.

Щоб переконатися у відсутності бактеріального, грибкового або дріжджового забруднення, клітинні культури піддаються щоденному візуальному контролю.

Для тривалого зберігання помістіть флакони в парофазний рідкий азот при температурі від -150 до -196 °C. Зберігання при -80 °C допустиме лише як короткий проміжний етап перед перенесенням у рідкий азот.

Кріоконсервовані клітинні лінії транспортуються на сухому льоду в перевіреній ізольованій упаковці з достатньою кількістю холодоагенту для підтримання температури приблизно -78 °C під час транспортування. При отриманні негайно огляньте контейнер і без зволікань перемістіть флакони у відповідне місце зберігання.

У Cytion ми відповідаємо за якість та життєздатність нашої продукції. Ми гарантуємо, що наші клітини будуть життєздатними на початку культивування протягом 60 днів після відвантаження з нашого заводу. Ми запевняємо, що всі матеріали відповідають специфікаціям, описаним у сертифікаті аналізу та/або паспорті продукту

Для отримання більш детальної інформації, будь ласка, зверніться до нашого <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Заяви про гарантію</a>