Wilms3

Wilms3 šūnu līnija tika izveidota no primārā Vilmsa audzēja, kas radies pediatriskai pacientei, kurai bija raksturīga somatiska WT1 mutācija. Atšķirībā no daudzām citām Vilmsa audzēja šūnu līnijām Wilms3 ir heterozigotiska WT1 gēna mutācija (c.1293-1294insA, p.V432SfsX87), kas izraisa saīsināta WT1 proteīna veidošanos. Šis daļējais WT1 funkcijas zudums ir saistīts ar audzēju attīstību, kam raksturīgs stromāls vai mezenhīma fenotips. Tomēr WT1 mutācija Wilms3 gadījumā nav homozigota, kas sarežģī tās izpēti, jo tā saglabā daļu WT1 funkcijas, kas var ietekmēt audzēja bioloģiju atšķirīgi salīdzinājumā ar šūnu līnijām ar pilnīgu WT1 zudumu.

Wilms3 ir arī mutācija CTNNB1 gēnā, kas īpaši ietekmē 41. treonīnu (p.T41A), kuram ir izšķiroša nozīme Wnt signalizācijas ceļā. Šī mutācija stabilizē β-Catenin, novēršot tā noārdīšanos un izraisot konstitīvu Wnt ceļa aktivizāciju. Pastāvīga Wnt signālu aktivizācija veicina šūnu proliferāciju un sekmē audzēju veidošanos Wilms3, padarot to par galveno modeli CTNNB1 mutāciju ietekmes izpētei daļēji funkcionālā WT1 fona kontekstā.

Fenotipiski Wilms3 šūnām piemīt mezenhimālai morfoloģijai līdzīga morfoloģija, tās ekspresē vimentīnu un tām trūkst citokeratīna, kas atbilst sākotnējā audzējā novērotajām stromas īpašībām. Šīm šūnām piemīt ierobežots diferenciācijas potenciāls, un īpašos apstākļos tās spēj daļēji mezenhimāli diferencēties. Wilms3 proteomikas analīzes atklāja vairāku receptoru tirozīna kināžu (RTK), tostarp PDGFRβ un AXL, aktivizāciju, kas veicina šūnu izdzīvošanu un proliferāciju. Turklāt tiek aktivizēti tādi pakārtotie signalizācijas ceļi kā MAPK un PI3K/AKT, kas pastiprina Wilms3 šūnu ļaundabīgās īpašības.

Wilms3 unikāls aspekts ir tā daļējā WT1 funkcionalitāte, kas sniedz atšķirīgu skatījumu uz to, kā WT1 mutācijas veicina Wilms audzēja bioloģiju, ja mutācija nav pilnīga. WT1 un Wnt signālu mijiedarbība Wilms3 mutācijā sniedz vērtīgu iespēju pētīt niansētu lomu, kāda šiem ceļiem ir audzēja attīstībā. Kopumā Wilms3 kalpo kā svarīgs modelis, lai pētītu molekulāros mehānismus, kas ir Vilmsa audzēja pamatā, ja ir daļējs WT1 zudums un konstitīva Wnt ceļa aktivācija.

37°C, 5%_CO2, mitrināta atmosfēra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

Uzņēmumā Cytion mēs atbalstām savu produktu kvalitāti un dzīvotspēju. Mēs garantējam, ka mūsu šūnas būs dzīvotspējīgas kultivēšanas sākumā 60 dienas pēc nosūtīšanas no mūsu ražotnēm. Mēs nodrošinām, ka visi materiāli atbilst analīzes sertifikātā un/vai produkta lapā aprakstītajām specifikācijām

Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet mūsu <a href=""/"/Kas mēs esam/garantija/"" hreflang=""x-default"">Garantijas paziņojumu