Wilms8

Wilms8 šūnu līnija tika iegūta no primārā Wilms audzēja pediatriska pacienta ar iegremdētu WT1 mutāciju. Šai šūnu līnijai ir raksturīga homozigotiska bezjēdzīga WT1 gēna mutācija (c.1168 C>T, p.R390X), kas izraisa pilnīgu WT1 funkcijas zudumu. WT1 ir ļoti svarīgs normālai nieru attīstībai, un tā inaktivācija ir raksturīga dažiem agresīviem Vilmsa audzēju apakštipiem, jo īpaši tiem, kuriem ir mezenhimāla diferenciācija. Tāpēc Wilms8 ir vērtīgs modelis, lai pētītu WT1 zuduma ietekmi uz audzēju ģenēzi, jo īpaši saistībā ar Wilms audzējiem, kas veidojas ar izteiktu stromālo komponentu.

Papildus WT1 mutācijai Wilms8 šūnās ir mutācija CTNNB1 gēnā (p.S45A), kas kodē β-katenīnu, galveno Wnt signalizācijas ceļa regulatoru. Mutācija pie serīna 45 pārtrauc normālu fosforilēšanas procesu, kas izraisa β-Catenin degradāciju, izraisot tā stabilizāciju un uzkrāšanos kodolā. Tas izraisa konstitīvu Wnt signalizācijas aktivizāciju, kas veicina šūnu proliferāciju un sekmē Wilms8 šūnu līnijas onkogēnās īpašības. Savstarpējā mijiedarbība starp WT1 zudumu un aberantu Wnt signalizāciju Wilms8 līnijā padara to par būtisku modeli, lai izprastu molekulāros mehānismus, kas ir šo ceļu pamatā Wilms audzēju bioloģijā.

Wilms8 šūnām ir mezenhīma fenotips, ko raksturo vimentīna ekspresija un epitēlija marķieru, piemēram, citokeratīna, neesamība. Tas atbilst sākotnējā audzējā novērotajai stromālajai diferenciācijai. Šīm šūnām ir ierobežota spēja turpināt mezenhimālo diferenciāciju, piemēram, veidojot muskuļiem līdzīgas šūnas īpašos apstākļos. Wilms8 proteomikas analīzes ir atklājušas vairāku receptoru tirozīna kināžu (RTK), tostarp PDGFRβ un AXL, aktivizāciju, kas ir iesaistītas tādos svarīgos procesos kā šūnu izdzīvošana, migrācija un proliferācija. Pakārtoto signalizācijas ceļu, jo īpaši MAPK un PI3K/AKT ceļu, aktivizācija vēl vairāk veicina Wilms8 šūnu agresīvās īpašības.

Kopumā Wilms8 šūnu līnija kalpo kā būtisks rīks, lai pētītu molekulāro pamatu Wilms audzējiem, ko izraisa WT1 zudums un aberatīva Wnt signalizācija. Tās ģenētiskās un fenotipiskās īpašības padara to par stabilu platformu, lai pētītu mijiedarbību starp šiem svarīgajiem ceļiem un identificētu potenciālos terapeitiskos mērķus Vilmsa audzējiem ar stromālo komponentu.

37°C, 5%_CO2, mitrināta atmosfēra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

Uzņēmumā Cytion mēs atbalstām savu produktu kvalitāti un dzīvotspēju. Mēs garantējam, ka mūsu šūnas būs dzīvotspējīgas kultivēšanas sākumā 60 dienas pēc nosūtīšanas no mūsu ražotnēm. Mēs nodrošinām, ka visi materiāli atbilst analīzes sertifikātā un/vai produkta lapā aprakstītajām specifikācijām

Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet mūsu <a href=""/"/Kas mēs esam/garantija/"" hreflang=""x-default"">Garantijas paziņojumu