Wilms8

Wilms8 hücre hattı, germline WT1 mutasyonu olan bir pediatrik hastadaki primer Wilms tümöründen türetilmiştir. Bu hücre hattı, WT1 geninde homozigot saçma mutasyon (c.1168 C>T, p.R390X) ile karakterize edilir ve WT1 fonksiyonunun tamamen kaybına yol açar. WT1 normal böbrek gelişimi için çok önemlidir ve inaktivasyonu Wilms tümörünün bazı agresif alt tiplerinde, özellikle de mezenkimal farklılaşma gösterenlerde ortak bir özelliktir. Bu nedenle Wilms8, özellikle belirgin bir stromal bileşenle ortaya çıkan Wilms tümörleri bağlamında, WT1 kaybının tümörigenez üzerindeki etkilerini incelemek için değerli bir model sağlar.

WT1 mutasyonuna ek olarak, Wilms8 hücreleri, Wnt sinyal yolunun önemli bir düzenleyicisi olan β-Katenin'i kodlayan CTNNB1 geninde (p.S45A) bir mutasyon barındırır. Serin 45'teki mutasyon, β-Catenin degradasyonuna yol açan normal fosforilasyon sürecini bozarak stabilizasyonuna ve çekirdekte birikmesine neden olur. Bu, hücre çoğalmasını sağlayan ve Wilms8 hücre hattının onkojenik özelliklerine katkıda bulunan Wnt sinyalinin yapısal aktivasyonu ile sonuçlanır. Wilms8'de WT1 kaybı ve anormal Wnt sinyali arasındaki etkileşim, Wilms tümör biyolojisinde bu yolakların altında yatan moleküler mekanizmaları anlamak için çok önemli bir model haline getirmektedir.

Wilms8 hücreleri, vimentin ekspresyonu ve sitokeratin gibi epitelyal belirteçlerin yokluğu ile karakterize mezenkimal bir fenotip sergilemektedir. Bu, orijinal tümörde gözlenen stromal farklılaşma ile uyumludur. Hücreler, belirli koşullar altında kas benzeri hücreler oluşturmak gibi daha fazla mezenkimal farklılaşma geçirme konusunda sınırlı bir yetenek gösterir. Wilms8'in proteomik analizleri, PDGFRβ ve AXL dahil olmak üzere, hücre sağkalımı, göçü ve çoğalması gibi kilit süreçlerde rol oynayan çoklu reseptör tirozin kinazların (RTK'lar) aktivasyonunu ortaya çıkarmıştır. Özellikle MAPK ve PI3K/AKT yolakları olmak üzere aşağı akış sinyal yolaklarının aktivasyonu, Wilms8 hücrelerinin agresif özelliklerine daha fazla katkıda bulunur.

Genel olarak, Wilms8 hücre hattı, WT1 kaybı ve anormal Wnt sinyali tarafından yönlendirilen Wilms tümörünün moleküler temelini araştırmak için önemli bir araç görevi görmektedir. Genetik ve fenotipik özellikleri onu, bu kritik yolaklar arasındaki etkileşimi incelemek ve stromal bileşenli Wilms tümörlerinde potansiyel terapötik hedefleri belirlemek için sağlam bir platform haline getirmektedir.

37°C, %5_CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

Cytion olarak ürünlerimizin kalitesinin ve canlılığının arkasındayız. Hücrelerimizin, tesislerimizden sevkiyattan sonra 60 gün boyunca kültürün başlangıcında canlı olacağını garanti ediyoruz. Tüm malzemelerin Analiz Sertifikası ve/veya Ürün Sayfasında açıklanan özelliklere uygun olduğunu garanti ediyoruz

Tüm ayrıntılar için lütfen <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garanti Beyanımıza bakın