Wilms8

La línea celular Wilms8 se derivó de un tumor de Wilms primario en un paciente pediátrico con una mutación germinal en el gen WT1. Esta línea celular se caracteriza por una mutación sin sentido homocigótica en el gen WT1 (c.1168 C>T, p.R390X), lo que provoca una pérdida total de la función de WT1. El gen WT1 es crucial para el desarrollo normal del riñón, y su inactivación es una característica común en ciertos subtipos agresivos del tumor de Wilms, particularmente aquellos que presentan diferenciación mesenquimal. Por lo tanto, Wilms8 ofrece un modelo valioso para estudiar los efectos de la pérdida de WT1 en la tumorigénesis, especialmente en el contexto de los tumores de Wilms que surgen con un componente estromal pronunciado.

Además de la mutación en el gen WT1, las células Wilms8 presentan una mutación en el gen CTNNB1 (p.S45A), que codifica la β-catenina, un regulador clave de la vía de señalización Wnt. La mutación en la serina 45 interrumpe el proceso normal de fosforilación que conduce a la degradación de la β-catenina, lo que provoca su estabilización y acumulación en el núcleo. Esto da lugar a la activación constitutiva de la señalización Wnt, la cual impulsa la proliferación celular y contribuye a las propiedades oncogénicas de la línea celular Wilms8. La interacción entre la pérdida de WT1 y la señalización Wnt anómala en Wilms8 la convierte en un modelo crucial para comprender los mecanismos moleculares subyacentes a estas vías en la biología del tumor de Wilms.

Las células Wilms8 presentan un fenotipo mesenquimal, caracterizado por la expresión de vimentina y la ausencia de marcadores epiteliales como la citoqueratina. Esto concuerda con la diferenciación estromal observada en el tumor original. Las células muestran una capacidad limitada para sufrir una mayor diferenciación mesenquimal, como la formación de células de tipo muscular en condiciones específicas. Los análisis proteómicos de Wilms8 han revelado la activación de múltiples receptores de tirosina quinasa (RTK), incluidos PDGFRβ y AXL, que participan en procesos clave como la supervivencia, la migración y la proliferación celular. La activación de las vías de señalización posteriores, en particular las vías MAPK y PI3K/AKT, contribuye aún más a las características agresivas de las células Wilms8.

En general, la línea celular Wilms8 sirve como una herramienta esencial para investigar la base molecular del tumor de Wilms impulsado por la pérdida de WT1 y la señalización anómala de Wnt. Sus características genéticas y fenotípicas la convierten en una plataforma sólida para estudiar la interacción entre estas vías críticas y para identificar posibles dianas terapéuticas en los tumores de Wilms con un componente estromal.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.