Wilms8

Wilms8 rakuliin on saadud Wilmsi primaarsest Wilmsi kasvajast, mis pärineb WT1 mutatsiooniga pediaatrilisest patsiendist. Seda rakuliini iseloomustab homosügootne nonsense-mutatsioon WT1 geenis (c.1168 C>T, p.R390X), mis põhjustab WT1 funktsiooni täieliku kadumise. WT1 on neerude normaalseks arenguks hädavajalik ja selle inaktiveerimine on levinud Wilmsi kasvaja teatud agressiivsete alatüüpide puhul, eriti nende puhul, millel on mesenhüümiline diferentseerumine. Wilms8 on seega väärtuslik mudel WT1 kaotuse mõju uurimiseks kasvajate tekkimisele, eriti selliste Wilmsi kasvajate puhul, mis tekivad tugeva stromaalse komponendiga.

Lisaks WT1 mutatsioonile on Wilms8 rakkudes mutatsioon CTNNB1 geenis (p.S45A), mis kodeerib β-kateniini, mis on Wnt-signaaltee peamine regulaator. Mutatsioon seriini 45 juures häirib normaalset fosforüleerimisprotsessi, mis viib β-kateniini lagunemiseni, põhjustades selle stabiliseerumist ja akumuleerumist tuumas. Selle tulemuseks on Wnt-signalisatsiooni konstitutiivne aktiveerimine, mis juhib rakkude proliferatsiooni ja aitab kaasa Wilms8 rakuliini onkogeensetele omadustele. WT1 kaotuse ja Wnt-signalisatsiooni hälbimise vastastikune mõju Wilms8-s muudab selle oluliseks mudeliks, et mõista nende radade aluseks olevaid molekulaarseid mehhanisme Wilmsi kasvaja bioloogias.

Wilms8 rakkudel on mesenhüümiline fenotüüp, mida iseloomustab vimentiini ekspressioon ja epiteeli markerite, näiteks tsütokeratiini puudumine. See on kooskõlas algses kasvajas täheldatud stromaalse diferentseerumisega. Need rakud näitavad piiratud võimet edasiseks mesenhüümiliseks diferentseerumiseks, nagu näiteks lihasarnaste rakkude moodustamine spetsiifilistes tingimustes. Wilms8 proteoomilised analüüsid on näidanud mitmete retseptori türosiini kinaaside (RTK), sealhulgas PDGFRβ ja AXL aktiveerimist, mis osalevad sellistes olulistes protsessides nagu rakkude ellujäämine, migratsioon ja proliferatsioon. Wilms8 rakkude agressiivsetele omadustele aitab lisaks kaasa allavoolu signaaliradade, eelkõige MAPK ja PI3K/AKT radade aktiveerimine.

Kokkuvõttes on Wilms8 rakuliin oluline vahend Wilmsi tuumori molekulaarse aluse uurimiseks, mis on tingitud WT1 kaotusest ja Wnt-signalisatsiooni kõrvalekaldumisest. Selle geneetilised ja fenotüüpilised omadused teevad sellest tugeva platvormi nende kriitiliste radade vahelise koostoime uurimiseks ja võimalike terapeutiliste sihtmärkide tuvastamiseks Wilmsi kasvajate puhul, millel on stromaalne komponent.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest