Wilms8

สายเซลล์ Wilms8 ถูกแยกได้จากเนื้องอก Wilms ชนิดปฐมภูมิในผู้ป่วยเด็กที่มีการกลายพันธุ์ WT1 ในสายพันธุกรรมปกติ สายเซลล์นี้มีลักษณะเด่นคือการกลายพันธุ์แบบ nonsense แบบโฮโมไซโกตในยีน WT1 (c.1168 C>T, p.R390X) ซึ่งนำไปสู่การสูญเสียการทำงานของ WT1 อย่างสมบูรณ์WT1 มีความสำคัญอย่างยิ่งต่อการพัฒนาไตปกติ และการไม่ทำงานของยีนนี้เป็นลักษณะที่พบได้บ่อยในมะเร็งเนื้องอกของวิลส์บางชนิดที่มีความรุนแรงสูง โดยเฉพาะอย่างยิ่งชนิดที่มีการเปลี่ยนแปลงเป็นเซลล์ต้นกำเนิดของเนื้อเยื่อเกี่ยวพัน (mesenchymal differentiation) ดังนั้น Wilms8 จึงเป็นแบบจำลองที่มีคุณค่าสำหรับการศึกษาผลกระทบของการสูญเสีย WT1 ต่อการเกิดเนื้องอก โดยเฉพาะอย่างยิ่งในบริบทของมะเร็งเนื้องอกของวิลส์ที่เกิดขึ้นพร้อมกับองค์ประกอบของเนื้อเยื่อเกี่ยวพันที่เด่นชัด

นอกเหนือจากการกลายพันธุ์ของ WT1 แล้ว เซลล์ Wilms8 ยังมีการกลายพันธุ์ในยีน CTNNB1 (p.S45A) ซึ่งเข้ารหัสโปรตีน β-Catenin ซึ่งเป็นตัวควบคุมสำคัญของเส้นทางสัญญาณ Wnt การกลายพันธุ์ที่ตำแหน่งเซรีน 45 จะรบกวนกระบวนการฟอสโฟรีเลชันตามปกติที่นำไปสู่การสลายตัวของ β-Catenin ส่งผลให้ β-Catenin มีความเสถียรและสะสมในนิวเคลียสมากขึ้นผลลัพธ์คือการกระตุ้นเชิงโครงสร้างของสัญญาณ Wnt ซึ่งกระตุ้นการเพิ่มจำนวนของเซลล์และมีส่วนทำให้เกิดคุณสมบัติก่อมะเร็งของเซลล์สายพันธุ์ Wilms8 การมีปฏิสัมพันธ์ระหว่างการสูญเสีย WT1 และสัญญาณ Wnt ที่ผิดปกติใน Wilms8 ทำให้เป็นแบบจำลองที่สำคัญสำหรับการทำความเข้าใจกลไกโมเลกุลที่อยู่เบื้องหลังเส้นทางเหล่านี้ในชีววิทยาของเนื้องอก Wilms

เซลล์ Wilms8 แสดงลักษณะฟีโนไทป์แบบมีเซนไคม์ ซึ่งมีลักษณะเด่นคือการแสดงออกของวีเมนตินและการขาดตัวบ่งชี้ของเซลล์เยื่อบุผิว เช่น ไคโตแครทิน ซึ่งสอดคล้องกับการเปลี่ยนแปลงของสโตรมาที่พบในเนื้องอกต้นกำเนิด เซลล์เหล่านี้แสดงให้เห็นถึงความสามารถที่จำกัดในการเปลี่ยนแปลงเป็นลักษณะมีเซนไคม์เพิ่มเติม เช่น การสร้างเซลล์คล้ายกล้ามเนื้อภายใต้สภาวะเฉพาะการวิเคราะห์โปรตีโอมิกส์ของ Wilms8 ได้เปิดเผยการกระตุ้นของไทโรซีนไคเนสชนิดรีเซพเตอร์ (RTKs) หลายชนิด รวมถึง PDGFRβ และ AXL ซึ่งเกี่ยวข้องกับกระบวนการสำคัญ เช่น การอยู่รอดของเซลล์ การเคลื่อนที่ และการเพิ่มจำนวน การกระตุ้นของเส้นทางสัญญาณในขั้นถัดไป โดยเฉพาะเส้นทาง MAPK และ PI3K/AKT ยังมีส่วนช่วยเสริมลักษณะที่ก้าวร้าวของเซลล์ Wilms8 อีกด้วย

โดยรวมแล้ว สายเซลล์ Wilms8 ทำหน้าที่เป็นเครื่องมือสำคัญในการศึกษาพื้นฐานทางโมเลกุลของเนื้องอก Wilms ที่เกิดจากการสูญเสีย WT1 และการส่งสัญญาณ Wnt ที่ผิดปกติ คุณลักษณะทางพันธุกรรมและฟีโนไทป์ของมันทำให้เป็นแพลตฟอร์มที่แข็งแกร่งสำหรับการศึกษาปฏิสัมพันธ์ระหว่างเส้นทางสำคัญเหล่านี้และสำหรับการระบุเป้าหมายการรักษาที่เป็นไปได้ในเนื้องอก Wilms ที่มีองค์ประกอบของสโตรมา

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.