Wilms8

Die Wilms8-Zelllinie wurde aus einem primären Wilms-Tumor eines pädiatrischen Patienten mit einer WT1-Keimbahnmutation gewonnen. Diese Zelllinie ist durch eine homozygote Nonsense-Mutation im WT1-Gen (c.1168 C>T, p.R390X) gekennzeichnet, die zu einem vollständigen Verlust der WT1-Funktion führt. WT1 ist von entscheidender Bedeutung für die normale Nierenentwicklung, und seine Inaktivierung ist ein gemeinsames Merkmal bestimmter aggressiver Subtypen von Wilms-Tumoren, insbesondere solcher, die eine mesenchymale Differenzierung aufweisen. Wilms8 ist daher ein wertvolles Modell für die Untersuchung der Auswirkungen des WT1-Verlusts auf die Tumorgenese, insbesondere im Zusammenhang mit Wilms-Tumoren, die mit einer ausgeprägten stromalen Komponente entstehen.

Zusätzlich zur WT1-Mutation weisen Wilms8-Zellen eine Mutation im CTNNB1-Gen (p.S45A) auf, das für β-Catenin kodiert, einen wichtigen Regulator des Wnt-Signalwegs. Die Mutation an Serin 45 unterbricht den normalen Phosphorylierungsprozess, der zum Abbau von β-Catenin führt, und bewirkt dessen Stabilisierung und Anreicherung im Zellkern. Dies führt zu einer konstitutiven Aktivierung der Wnt-Signalübertragung, die die Zellproliferation antreibt und zu den onkogenen Eigenschaften der Wilms8-Zelllinie beiträgt. Das Zusammenspiel von WT1-Verlust und abweichender Wnt-Signalisierung in Wilms8 macht diese Zelllinie zu einem wichtigen Modell für das Verständnis der molekularen Mechanismen, die diesen Signalwegen in der Biologie des Wilms-Tumors zugrunde liegen.

Wilms8-Zellen weisen einen mesenchymalen Phänotyp auf, der durch die Expression von Vimentin und das Fehlen von Epithelmarkern wie Cytokeratin gekennzeichnet ist. Dies stimmt mit der im ursprünglichen Tumor beobachteten stromalen Differenzierung überein. Die Zellen zeigen eine begrenzte Fähigkeit zur weiteren mesenchymalen Differenzierung, z. B. zur Bildung muskelähnlicher Zellen unter bestimmten Bedingungen. Proteomanalysen von Wilms8 haben die Aktivierung mehrerer Rezeptortyrosinkinasen (RTKs), einschließlich PDGFRβ und AXL, gezeigt, die an Schlüsselprozessen wie Zellüberleben, Migration und Proliferation beteiligt sind. Die Aktivierung nachgeschalteter Signalwege, insbesondere der MAPK- und PI3K/AKT-Signalwege, trägt weiter zu den aggressiven Eigenschaften der Wilms8-Zellen bei.

Insgesamt dient die Wilms8-Zelllinie als wichtiges Instrument zur Untersuchung der molekularen Grundlagen des Wilms-Tumors, der durch den Verlust von WT1 und eine abweichende Wnt-Signalübertragung ausgelöst wird. Ihre genetischen und phänotypischen Merkmale machen sie zu einer robusten Plattform für die Untersuchung der Interaktion zwischen diesen kritischen Signalwegen und für die Identifizierung potenzieller therapeutischer Ziele bei Wilms-Tumoren mit einer stromalen Komponente.

37°C, 5%_CO2, befeuchtete Atmosphäre.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

Bei Cytion stehen wir hinter der Qualität und Lebensfähigkeit unserer Produkte. Wir garantieren, dass unsere Zellen zu Beginn der Kultur für 60 Tage nach dem Versand aus unseren Einrichtungen lebensfähig sind. Wir versichern, dass alle Materialien mit den im Analysezertifikat und/oder Produktblatt beschriebenen Spezifikationen übereinstimmen

Ausführliche Informationen finden Sie in unserer <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantieerklärung